2005国际clsiccls-m100药敏试验标准指南解读.docx

2005国际clsiccls-m100药敏试验标准指南解读 在大多数国家，美国临床实验室（cnis）推荐的药物过敏试验方法和评估基准。2005年该委员会更名为临床试验标准研究所 (CLSI) , 考虑到大多数国家地区的习惯, 在过渡时期暂时称为CLSI/NCCLS, 其相应的标准改称为CLSI文件。 CLSI/NCCLS-M100药敏测定指南为适应临床实际工作的需要, 每年都会依实际情况加以更新和修订。2005版CLSI/NCCLS M100-S15的主要增补内容包括药敏试验培养温度、达托霉素药敏试验和报告、药敏试验质量保证菌株的使用、β-溶血链球菌克林霉素诱导耐药的检测、产超广谱β内酰氨酶菌株 (ESBL) 筛选试验及确证试验在奇异变形杆菌中的应用、脑膜炎奈瑟球菌的药敏试验等内容。本文就相关内容予以介绍, 以使国内业界同行们对此有一定的了解。 一、 假阳性鉴定难 1. 葡萄球菌属33~35℃, 不要超过35℃。其原因是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) 和MRCNS的鉴定在超过35℃时存在假阳性问题。 2. 其他细菌的药敏试验培养温度在35℃±2℃。 二、 达托激素的作用机制 达托霉素是由美国礼来公司最初研究, Cubist制药公司开发的一环脂肽类抗生素。2003年底, 美国食品与药品管理局经过快速审理程序批准注射用达托霉素用于治疗由一些革兰氏阳性敏感菌引起的并发性皮肤感染及皮肤感染。达托霉素的作用机制与其他抗生素不同, 它通过扰乱细胞膜对氨基酸的转运, 从而阻碍细菌细胞壁肽聚糖的生物合成。此外, 它还能通过破坏细菌的细胞膜, 使其内容物外泄而达到杀菌的目的。达托霉素对葡萄球菌和肠球菌的判定标准见表1。 达托霉素仅限于对葡萄球菌、肠球菌和β溶血链球菌的药敏试验, 当出现非敏感结果时, 应重新鉴定菌种和重复药敏试验。值得注意的是纸片扩散法很难发现对达托霉素敏感性降低的葡萄球菌最低抑菌浓度 (MIC1μg/ml) 和肠球菌 (MIC4μg/ml) , 临床治疗的失败可能由于纸片扩散法判定为“S”菌株, 而实际上对达托霉素敏感性降低。 三、 质控和质量保证试验 纸片扩散法中, 最常用的质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922, 金黄色葡萄球菌 ATCC25923和铜绿假单胞菌 ATCC27853。测定MIC最常用的菌株为大肠埃希菌ATCC25922, 金黄色葡萄球菌 ATCC29213和铜绿假单胞菌 ATCC27853。在检测产超广谱β-内酰胺酶菌株时, 必须增加肺炎克雷伯菌ATCC700603作为质控菌株。 每日或每周进行质控试验可以保证得到准确的结果。当质控结果可以接受时说明药敏试验所使用设备、试剂、培养基及耗材和试验过程是符合要求的。如在“D”试验使用金黄色葡萄球菌ATCC25923作为质控菌株。 使用ATCC菌种进行质量保证, 其目的是训练操作人员如何准确地进行药敏试验并得到可靠的结果, 保证每个操作者具有正确进行药敏试验的能力。同时, 还可用以评价结果的准确性。如2005版CLSI/NCCLS 在“D”试验中增加QA菌株金黄色葡萄球菌ATCCBAA-976 (msrA) 和金黄色葡萄球菌ATCCBAA-977 (ermA) , 分别作为“D”试验阴性和阳性结果的对照。 对产ESBL筛选和确证试验时也应加强质控和质保菌株的试验 (表2) 。 由于肺炎克雷伯菌ATCC700603的ESBL基因存在于质粒上, 因此应保存该菌在-60℃或者更低的环境下。 四、 产esbl的异变形杆菌的筛选 奇异变形杆菌-ESBL试验:奇异变形杆菌产ESBL菌株在美国罕见, 有报道在171株奇异变形杆菌中仅1株为产ESBL株。因此, 2005版CLSI/NCCLS并不推荐对奇异变形杆菌进行常规ESBL筛选试验。但在某些地区如欧洲、南美等地, 产ESBL的奇异变形杆菌分离率较高, 常引起医院感染的暴发。 当从患者无菌部位分离到奇异变形杆菌, 特别是当奇异变形杆菌所引起的菌血症时, 有必要与临床医生商议进行ESBL试验。2005版CLSI/NCCLS所规定的奇异变形杆菌的ESBL筛选试验与大肠埃希菌、产酸和肺炎克雷伯菌筛选试验有所不同, 其中头孢泊肟的MIC值为≥2μg/ml。确证试验的判定标准与大肠埃希菌、产酸和肺炎克雷伯菌的相同。奇异变形杆菌ESBLS筛选试验的判定标准见表3。 五、 抗感染药物的敏感试验 2005版CLSI/NCCLS M7 (MIC) 表建议对不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌 (不包括铜绿假单胞菌) 可常规进行以下药物的敏感性试验, 包括替卡西林/克拉维酸、复方磺胺甲噁唑、头孢噻肟或头孢曲松、氯霉素、头孢唑肟和四环素。而头孢唑肟和四环素仅限于尿道分离株的MIC试验。 近年来, 多重耐药的鲍曼不动杆菌使临床抗感染