植物提取物抗氧化活性评价 薄层色谱法-编制说明.pdfVIP

《植物提取物抗氧化活性评价 薄层色 谱法》国家标准编制说明 1 任务来源 本国家标准的制定任务是根据国家标准化管理委员会下达的国家标准制定 计划《植物提取物抗氧化活性评价 薄层色谱法》项目（计划号T-424 ） 起草。国家标准计划《植物提取物抗氧化活性评价 薄层色谱法》由424-cnis （中 国标准化研究院）归口上报及执行，主管部门为国家市场监督管理总局(质检) 。 本标准由江南大学，南昌大学，国家食品安全风险评估中心，北京理化分析测 试中心、中国标准化研究院、中国计量科学研究院等单位共同起草。本标准主 要起草人：陈益胜、徐学明、金征宇、席兴军、兰韬、陶红、黄彩虹、舒蓝萍 等。 2 起草的目的意义 2.1 企业产品开发和质量控制的需要 抗氧化是抗衰老、抗疲劳、抗炎等生物活性的重要基础。绝大部分以植物提 取物为原料的功能食品都含有大量抗氧化活物质，例如芦丁、槲皮素、花青素、 茶多酚等。目前，我国生产具有抗氧化功能产品（药品、食品和保健品等）的 规模以上企业多达2000 多家，已经形成了2300 多亿元的产业规模。这些产品 的原料大部分来自农业废弃物。 槐米是目前最具有抗氧化活性潜力的农业废弃物之一。槐米是槐树花蕾干燥 后的产物，其中含有丰富的黄酮、皂苷和甾醇等生物活性物质。芦丁（Rutin ）， 又称为维生素 P ，是槐米中主要的黄酮类化合物，具有良好的抗氧化活性。不 仅如此，芦丁还具有降血清胆固醇、降血压、降血脂、降血糖和提高免疫力等 多种保健功效。例如，芦丁可以通过清除高血糖引发的过氧化物保护胰岛细胞 免受损伤，从而降低II 型糖尿病的发生风险。因此芦丁是一种极具开发前景的 糖尿病药物治疗先导化合物。我国槐树资源丰富，但是槐米的综合利用度很低。 因此，以槐米为资源开发以芦丁、槲皮素等为代表的抗氧化活性物质可以广泛 地应用到食品、保健品和药品工业领域，形成高附加值产品，不仅具有巨大的 经济价值，而且能够实现废弃资源利用。由此可见，因此，测定抗氧化活性的 高低已经成为评价植物提取物产品开发和质量控制的一个关键环节。 1 2.2 制定完善国家标准的需要 目前，植物提取物中抗氧化活性评价方法主要根据受试对象分为体内和体外 二大类。体内方法以丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽等为指标，测定其含 量来评价体内抗氧化活性的高低。体外抗氧化评价体系则以自由基清除法、氧 化还原法为主。体内方法的优势是更接近人体结果，但一般费时费力，且只能 反映某一指标活性的高低。体外方法则很好地弥补了这一缺点。其中，1,1-二 苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法是应用最广泛的抗氧化测定方法。必须注意的是， 常规的比色皿模式的DPPH 测定法将DPPH 溶液与样品直接混合，因此检测得 到的是样品总的抗氧化活性。然而，植物提取物原料通常是多元抗氧化活性物 质混合物。当这些物质混合在一起被DPPH 法测定的时候，相互之间可能存在 抗氧化拮抗或协同的效应，导致检测评估结果偏低或者偏高。此外，在很多评 价任务中，仅仅测定混合物样品的总抗氧化性常规的抗氧化活性评价方法基于 DPPH 分子与自由基混合后体系的颜色变化，利用紫外-可见分光光度计监测其 吸光度值变化可以实现对样品中总抗氧化活性的定量分析。但必须注意的是， 这种抗氧化评价方法有一个固有的缺点：检测选择性差。更确切地说，当样品 中含有两种或者两种以上的抗氧化活性物质的时候，分析结果无法区分每一种 物质的抗氧化活性高低。而基于实验动物模型的抗氧化评价方法时间长、成本 高且误差大，因此难以形成国家标准。 薄层色谱是近年来广泛应用到植物提取物分析的一项色谱分离技术。建立在 薄层色谱和DPPH 显色反应联用基础上的抗氧化分析方法兼备选择性高和通用 性好的优点。更重要的是，薄层色谱是目前唯一能与生化反应直接联用的色谱 工具。和传统的试管法测试不同，薄层色谱的色谱分离结果开放性和反应载体 功能可以从根本上解决基于 DPPH 变色反应的抗氧化评估方法选择性差的问 题。薄层分离使原本混在一起的不同抗氧化物质按分子结构的差异移动到薄层 板上不同的位置形成物理隔离，因而可以有效避免各种物质之间可存在的协同 或拮抗效应；随后，通过浸渍方式与薄层板耦合的DPPH 溶液可以方便地实现 对混合物中不同抗氧化组分的同时评估。因此，相对于传统的方法，建立在薄 层色谱和DPPH 显色反应基础上的抗氧化评价方法更加可靠，且更易形成标准。 2 3 薄层色谱研究、应用与标准现状