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sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示小分子多肽的方法 0 蛋白质分离和纯化 20世纪60年代，sh浦义洛成功建立了sds-u型。该方法表明，weber、glossynan和douglas在分离、鉴定和提取蛋白质方面发挥了优势，但对mri小于10000的蛋白质没有影响。在20世纪80年代初，schauager等人使用分离蛋白质含量低于10%的11种蛋白质，但分离效果并不理想，重复率低。之后，他们进行了系统的研究和探索，可以分离大多数mri区域内的蛋白质。随着生物技术的快速发展和科学研究的增多，高生物活性小分子候鸟的分离、提取和鉴定尤为重要。在开发和开发卵石-碎片方法的过程中，在低丙烯酸浓度下取得了理想的结果。该方法所需的机器简单、操作方便、重复性好、持续时间短，仅需要含量低，可以快速评估mr值，值得推广和使用。 1 材料和方法 1.1 试剂与模具 SDS、脲、甘油、过硫酸铵均为分析纯,西安化学试剂厂出品;丙烯酰胺(分析纯)为汕头市光华化学厂产品;N,N′-甲叉双丙烯酰胺(分析纯)为浙江黄岩人民化工厂生产; Tris(分析纯)为成都试剂厂出品;TEMED为BIO-RAD产品;Tricine(Ultra Pure Grade)为Solon Ind产品. BIO-RAD小型垂直式电泳附件模具;FD-201稳压稳流电泳仪(上海医用分析仪器厂). 1.2 药品、试剂与仪器 肽分子质量标准的Mr范围2512～16949为Pharmacia LKB 公司产品. 胸腺肽α1是美国加州圣马刁市赛生药品公司产品(商品名“ZADAXIN”),是一乙酰化的多肽,Mr为3108, pI 3.8. 经 Sephadex G-25柱去除所含的甘露醇, 然后冷冻干燥,用样品缓冲液配成所需样品. 1.3 方法 1.3.1 tis和n-甲叉双丙烯酰胺贮存液的制备 阳极缓冲液中Tris为0.2 mol·L-1用HCl调pH值至8.9. 阴极缓冲液为0.1 mol·L-1的Tris, 0.1 mol·L-1的Tricine和0.01 g·L-1的SDS溶液,其pH值约为8.25. 胶缓冲液为3.0 mol·L-1的Tris和 0.03 g·L-1的SDS,用HCl调pH值至8.4. 称取48 g丙烯酰胺和1.5 gN,N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100 mL纯水中,溶解混匀后经4号滤纸过滤即得到495 g·L-1T,30 g·kg-1C的贮存液;称取46.5 g丙烯酰胺和3.0 gN,N′-甲叉双丙烯酰胺溶于100 mL纯水中,同样得到495 g·L-1T,60 g·kg-1C的贮存液(T代表丙烯酰胺的总浓度,C代表交联度). 1.3.2 制造橡胶 与一般SDS电泳相似,按Tab 1给出的数据分别配制分离胶、间隙胶和浓缩胶,依次灌胶. 1.3.3 -2r-1r-2-基乙醇5-氯苯基-1,5-二氢-1,5-二氢-1,5-二氢-1,5-硫基-1,5-吡啶二氢-1,5-二氢-1,5-二氢-1,5-二氢-1,5-l,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-二氢-1,5-l-1,5-二氢-1,5-l-1,5-二氢-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-l-1,5-四甲基-1,5-1,5-l-1,5-1,5-四甲基-1,5-1,5-1,5-四甲基-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-四甲基-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-四甲基-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-1,5-2,5-四甲基-1,5-1,5-1,5-1,5-2,5-1,5-1,5-2,5-1,5-2,5-1,5-2,5-1,5-2,5-1,5-2,5-1,5-2,5-1,5-2 蛋白质样品与上样缓冲液(4 g·L-1SDS,120 g·L-1甘油,50 mol·L-1Tris,20 mL·L-1巯基乙醇含0.1 g·L-1溴酚蓝,pH 6.8)混合均匀,分别按40 ℃孵育30 min;60 ℃孵育10 min和煮沸2 min处理. 1.3.4 电泳条件 内槽装阴极缓冲液、外槽用阳极缓冲液恒压电泳,先40 V约1 h,当样品进入分离胶时,电压升至60 V约2 h. 1.3.5 醇v冰乙酸溶液 电泳完毕时胶置于染色液[ 2.5 g·L-1考马斯亮蓝R-250的乙醇(V)∶冰乙酸(V)∶水(V)为9∶2∶9 ]中振荡染色1.5～2 h,转至脱色液(400 mL·L-1的乙醇,40 mL·L-