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一种供应链鉴别冬虫夏草及其混淆品的方法 甘草是麦角菌科的一种真菌草地昆虫（sac）。寄生虫与蝙蝠昆虫后代的头部和幼体重组。近年来迅速发展,是一种常用的贵重中药材。由于其适生环境的限制,生长在西藏、青海及四川西部,海拔3 000 m以上,采收困难,生长年期长等原因,故现时仍难以人工培植,只有野生品种供应。又因其疗效显著,有补肺益肾,止血,化痰等功效,另现代药理研究指出,冬虫夏草还具有免疫调节、抗肿瘤、降血压、抗衰老和抗病毒等多种作用,故现多作为保健用途。人们对其需求越来越大,但在资源短缺的情况下,价格不断上升。同时,冬虫夏草及其混淆品(虫草类),一般较难以理化方法鉴别。本研究以来源于不同产地的虫草样本进行了性状及显微鉴别的研究。 1 供试菌株:青少年59号 Axioplan 2 universal microscope光学显微镜,Stemi 2000-C实体显微镜,徕卡 (Leica) IM 50软件。 冬虫夏草C.sinensis产自西藏及四川 (1～4号样本);亚香棒虫草C.hawkesii,香港购,产地不明 (5～7号样本);凉山虫草C.liangshanesis,产自四川及云南 (8～9号样本);新疆虫草C.gracilis,产自新疆 (10号样本);阔孢虫草C.crassispora,产自云南 (11号样本)。阔孢虫草由云南丽江市食品药品检验所黄云先主任鉴定;其余的虫草品种由香港卫生署中药主任刘宝玲教授鉴定。 2 方法和结果 2.1 属性评估方法 对5种虫草的虫体形状、大小、色泽和表面等特征进行鉴别。某些特征需采用实体显微镜观察。 2.2 体壁特征观察 把5种虫草的虫体研磨粉碎成中粉,以水合氯醛试液封藏。用显微镜观察虫体粉末的体壁特征等。照显微鉴别法(《中国药典》2010年版一部附录 II C)项下的方法制片观察。 2.3 性别鉴定研究 2.3.1 近下颌气的形态 虫体表面黄色至棕黄色。环纹明显,30～40个。足8对,其中4对明显。气门浅黄色至黄棕色,点状,背部有1对近头部的气门较明显。子座上部稍膨大,顶端不圆钝。 2.3.2 气孔红色 虫体表面浅黄色至深棕色。环纹稍明显,20～30个。足8对,不明显,大小相近。气门浅黄色至黄棕色,点状,多数,分布不规则。子座上部多膨大,顶端圆钝,有时可见2个或以上的分枝。 2.3.3 凉山昆虫采样号8.9 虫体表面黄棕色至橙棕色。环纹不明显,去菌膜后,可见20～30个环纹。足8对,不明显。气门不明显。缺子座或细长,顶端不圆钝。 2.3.4 新疆昆虫10 虫体表面棕黄色至红棕色。环纹明显,30～40个。足8对,其中4对明显。气门棕黑色,点状,多数。缺子座。 2.3.5 环纹、足及气功 虫体表面棕黄色至棕黑色,呈泡状不规则突起。环纹、足及气门均极不明显。子座多卷曲,上部多明显膨大,基部较细,顶端圆钝。 5种虫草的外形及区别见图1,2。 2.4 关于粉末的微观鉴定研究 2.4.1 形态的形态 虫体背部体壁细胞浅黄色至黄色。具大量的丛生刺状毛;上部较窄,基部较宽;顶端细尖。虫体足部具短刚毛,黄色至橙黄色,排列不规则;顶端钝圆,基部渐阔,有些上部略呈钩状。并具丛生微刺。 2.4.2 形态组织的形态 虫体背部体壁细胞浅黄色至黄棕色,可见深棕色斑点及网状纹理,侧面观呈紧密排列纵向延长的柱形细胞。虫体足部具短刚毛,黄色至棕黄色,排列整齐;棒状或基部渐阔;可见V-型刚毛。 2.4.3 凉山昆虫采样号8.9 虫体背部体壁细胞金黄色至褐黄色,沟纹明显;侧面观呈波浪纹排列。虫体足部具短刚毛,浅黄色至金黄色,排列不规则;顶端钝圆,基部较阔。 2.4.4 布短细胞一般形态 虫体背部体壁细胞黄色至棕黄色;表面观呈网状纹理;侧面观呈紧密排列纵向延长的柱形细胞。虫体足部具短刚毛,红黄色至棕黄色,排列不规则;顶端钝圆,基部较阔,有的呈椭圆形。 2.4.5 侧观图7 虫体背部体壁细胞金黄色,具有不规则的鱼鳞状纹理;侧面观呈层纹状或横向纹理。虫体足部具短刚毛,后者黄色至棕黄色,排列整齐;棒状或基部渐阔;有些上部略呈钩状。 5种虫草显微特征区别见表2,图3,4。 3 讨论 3.1 足部及病品特征 冬虫夏草与其他4种虫草属混淆品的主要区别有4点。环纹:冬虫夏草与新疆虫草环纹明显。其他虫草的不太明显。足部特征:冬虫夏草和新疆虫草均为足8对,其中4对明显。气门:亚香棒虫草的气门为多数,冬虫夏草的背部有1对近头部的气门较明显。而新疆虫草的气门棕黑色,点状,多数。子座:4种虫草的子座形态亦有不同。 3.2 胞的形态特征 5种虫草的背部及足部,有着不同的特征。背部主要观察虫体体壁细胞的纹理及短刚毛或刺状毛的有无;足部主要观察短刚毛形态及颜色。虫体特征,5种虫草中只有冬虫夏草有刺状毛,主要分布在背部及足部。另外,冬虫夏草的短刚毛排列方式