半薄切片技术介绍.ppt

第一页，共十八页，2022年，8月28日 半薄切片图片 第二页，共十八页，2022年，8月28日 钙化骨组织切片 眼球附近组织的连续切片 第三页，共十八页，2022年，8月28日 半薄切片：(厚度为 0.5μm ～ 1μm ) 第四页，共十八页，2022年，8月28日 半薄切片进行光学显微镜观察的目的： ①可以根据半薄切片精确定位。 ②了解样品包埋质量，以确定是否继续做超薄切片； ③与石蜡切片、超薄切片进行对比研究 第五页，共十八页，2022年，8月28日 半薄切片的优点： ?克服了超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性 ?清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像 ?也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。 第六页，共十八页，2022年，8月28日 电镜超薄技术中如何应用呢？ 电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品，造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在做超薄切片前要做半薄切片来进行定位。 第七页，共十八页，2022年，8月28日 应用： 胚胎学，病理学，动植物细胞学研究中一种普遍的切片方式 第八页，共十八页，2022年，8月28日 半薄切片主要步骤 ★取材 ★固定 ★漂洗、脱水 ★渗透、包埋 ★半薄切片 ★半薄切片染色 每一步都是关键,任何环节的疏忽都会导致制片的失败 第九页，共十八页，2022年，8月28日 FAA固定液 制备：福尔马林5-冰醋酸5-70%酒精90 应用：半薄/石蜡切片 适用：一般固定根、茎、叶、花药、子房组 织切片。 补充说明： 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收缩；加入5%甘油可防固定液蒸发和材料变硬。 第十页，共十八页，2022年，8月28日 卡诺固定液 1 2 纯酒精 15ml 30ml 氯仿 5ml 冰醋酸 5ml 1ml 渗透迅速，固定根尖和花药只需30-60分钟，但固定时间不能太久，一般不超过一天 第十一页，共十八页，2022年，8月28日 Leica RM2265旋转薄切片机 第十二页，共十八页，2022年，8月28日 Leica RM2265旋转薄切片机制作半薄切片（厚度0.25-5μm）使用步骤： 1．接通电源，打开主开关 2．选择切片厚度 3．安放包埋块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定挟紧 4．安放粘有水槽的玻璃刀，并将玻璃刀口对准样品 5．选择切片模式（自动/手动）， 切片计数开始 6．取切片的材料：捞片，置于载玻片上，加热，脱树脂处理，对材料染色，着色后冲洗、封藏、烘干 第十三页，共十八页，2022年，8月28日