植物组织培养外植体的选择与建立演示文稿.pptVIP

单独使用一种抗生素，通常效果很差，几种抗生素的配合使用，可以起到协同增益作用，但有时也可能使个别药物相互作用而失效。几种高浓度杀菌剂配合使用很可能对植物有毒害。 对于某一特定细菌，确定抗生素的最低杀菌剂量是很重要的，这种最低剂量可以通过不同浓度的抗生素与细菌进行液体共同培养来确定。若找到有效浓度，则在实验处理前就可确定对植物材料的毒性范围。 第三节 外植体（培养物）的建立 当前第30页\共有50页\编于星期四\2点 抗生素对植物材料的毒性因植物类型不同差异很大，因此，用植物离体培养进行基本的测试是实验成功的重要一步。由于植物毒性影响或抗生素渗透性差，在处理污染实验中，抗生素对分离组织也可能失效。了解抗生素对细菌和植物二者的效应，是消除污染和保护培养物的关键。 此外，抗生素常作为预防污染作用而加入到培养基中，或者在已鉴定出细菌污染的情况下，用于抑制细菌生长或消灭细菌。抗生素的抗菌作用在中性培养基(pH6.5—7.5)中比常规状态提高许多，而在酸性条件下则失效，而且抗生素具有热敏感性，不能采用高温高压灭菌，只能采用过滤灭菌的方法加入培养基。 第三节 外植体（培养物）的建立 当前第31页\共有50页\编于星期四\2点 （6）、特殊污染源： 污染中特别注意一种呈乳白色的细菌污染，这种细菌为芽孢杆菌。法国林木育种协会鉴定为迟缓芽孢杆菌(Bacilluslenlus)，它外被荚膜，耐高温，一般灭菌剂难以杀死。它可以随培养材料、用具等传播；它可出现在培养基表面，或呈滴形云雾状存在于培养基内。 若出现应及时淘汰污染源，并对所用过的器皿和用具进行严格高温灭菌处理。 第三节 外植体（培养物）的建立 当前第32页\共有50页\编于星期四\2点 5、褐变（Browning）： （1）、概念：外植体在培养容器中被氧化变褐而死亡的现象。 第三节 外植体（培养物）的建立 当前第33页\共有50页\编于星期四\2点 （2）、外植体材料褐化原理： 植物组织的褐化是通过含铜的氧化酶如多酚氧化酶和酪氨酸酶起作用所致，其作用的底物通常是酪氨酸和邻位羟酚类化合物如绿原酸等。酶和底物在植物正常生长的情况下是在组织内的不同部位，当细胞受伤或组织垂死时，酶和底物就跑到一起发生作用，当酚被氧化为活性酸化物和环形多聚体氧化蛋白时便形成深色化合物，这些物质又很快被氧化和变成复杂的抑制性物质，从而导致外植体材料变褐死亡并使培养基变褐 。 第三节 外植体（培养物）的建立 当前第34页\共有50页\编于星期四\2点 （3）、褐化发生的可能因素： 与组培植物品种有关： 不同的植物种与品种之间常有很大差异，有人把此归结为基因型的不同。一般来说，植物材料中单宁类和多种羟酚类化合物的含量高，易引起外植体材料的严重褐化。多数木本植物比草本植物易引起褐化，多年生草本植物比一年生草本植物易引起褐化 。 第三节 外植体（培养物）的建立 当前第35页\共有50页\编于星期四\2点 植物组织培养外植体的选择与建立演示文稿 当前第1页\共有50页\编于星期四\2点 优选植物组织培养外植体的选择与建立Ppt 当前第2页\共有50页\编于星期四\2点 第二节 外植体（培养物）的选择 根据细胞全能性学说，植物体的每一个细胞都含有全部的遗传信息，都能再生出一个新植株。但是，要使每个细胞的全能性都表现出来，在目前还是不易做到的事。因而，外植体（初始培养物）的选择非常重要。 当前第3页\共有50页\编于星期四\2点 1、基因型： 再生能力 （1）、双子叶单子叶； （2）、被子植物裸子植物； （3）、双子叶植物中：茄科（Solanacea）；秋海棠科（Begoniaceae）；景天科（Crassulaceae）；苦苣苔科（Gesneriaceae）；十字花科（Cruciferae）再生力特强；郁金香（Tulip）再生力较弱。 （4）、同一种植物中：活体（in vivo）再生力强者，离体（in vitro）再生力也强。 第二节 外植体（培养物）的选择 当前第4页\共有50页\编于星期四\2点 杜鹃花 ‘Rhodoendron’ 第二节 外植体（培养物）的选择 当前第5页\共有50页\编于星期四\2点 2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择： 生长 开花 童年期 转变年期 成年期 年 龄 阶段发育 第二节 外植体（培养物）的选择 当前第6页\共有50页\编于星期四\2点 2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择： 植株的生长与发育 第二节 外植体（培养物）的选择 当前第7页\共有50页\编于星期四\2点 2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择： 年龄或幼化程度 外植体建立 母株年龄和幼化程度与外植体建立 阶段发育 外植体建立 母株阶段发育与外植体建立 第二节 外植体（培养物）的选择 当前第8页\共有50