NY_T 2883-2016农药登记用日本血吸虫尾蚴防护剂药效试验方法及评价.pdf

ICS 65.100.01B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2883—2016农药登记用日本血吸虫尾呦防护剂药效试验方法及评价Efficacy test methods and evaluation of protective agent against Schistosomajaponicum cerariae for pesticide registration2016-10-01实施2016-05-23发布中华人民共和国农业部发布 NY/T2883—2016前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。?本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部农药检定所、湖南省血吸虫病防治所。本标准主要起草人：魏望远、朱春雨、易平、杨峻、张楠、曹艳、聂东兴I NY/T2883—2016农药登记用日本血吸虫尾防护剂药效试验方法及评价1范围本标准规定了日本血吸虫（Schistosomαjaponicum）尾坳防护剂（以下简称防护剂）室内和模拟现场药效试验方法和药效评价指标，本标准适用于农药登记用尾蜘防护剂的效果评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1日本血吸虫尾坳Schistosomajaponicumcercaria日本血吸虫生活史的一个阶段，由体部和尾部组成；尾蝴感染终宿主后发育成熟为日本血吸虫成虫。2. 2感染性钉螺infectedOncomelania snail能逸出日本血吸虫尾蝴的钉螺。2. 3虫负荷wormburden小鼠体内感染日本血吸虫成虫的数量。3仪器设备3.1体式显微镜放大倍数不低于10倍。3.2塑料储物箱内径长40cm，宽30cm，高25cm（或同体积容器），可容纳水体30l。3.3铁丝笼用铁丝制作成长方体网格型鼠笼.鼠笼规格为35cm×8cm×8cm.隔成5格，周边网格孔径0.5cm。鼠笼的底四角有可伸缩调节的脚柱，测定鼠笼可固定于塑料储物箱水面2cm处4试剂与材料4.1生物试材4.1.1日本血吸虫尾蜘将30只～50只日本血吸虫感染性钉螺.放入100ml的烧杯中，上盖尼龙纱网.倒入25℃脱氯水至淹没纱网，在白炽灯下逸蝴1h～2h获得尾蝴2000条左右用于室内防感染实验。4.1.2实验小鼠选取体重（20土2）g小鼠.雌雄各半，常规饲养1d以上。4.1.3感染性钉螺感染性钉螺可逸出尾蜘100条/只～500条/只。在钉螺饲养盘中（25土1）℃饲养1d以上用于模拟现场防坳感染实验。4.2脱毛膏4.3试验药剂制剂。4.4空白对照脱氯自来水。5试验条件与方法5.1试验条件温度为（25±1）℃，相对湿度为（60士5）%。 NY/T2883—20165.1.1尾坳活性鉴定方法试验时将尾置于解剖镜下观察.用解剖针轻刺尾坳，尾蝴活动良好者为活蜘，不活动或有软体肿胀、断尾、透明化的为死亡尾蜘或丧失入侵能力的尾坳，5.1.2小鼠解剖法用镊子将处死后的小鼠腹部皮肤提起，用剪刀剪开腹壁，打开腹腔，观察小鼠肝脏有无日本血吸虫虫卵沉着引起的肉芽肿-并取肉芽肿肝组织1g，在体式显微镜下观察血吸虫卵；分离肝门静脉、肠系膜静脉观察有无血吸虫成虫。若发现成虫，则将内脏取出放入平血中，加人生理盐水，分离检出所有血吸虫成虫.观察并记录单雌虫数、单雄虫数和雌雄合抱虫数。5.2室内防坳感染试验设待测药剂组和空白对照组，每组试验小鼠10只，雌雄各半。将试验小鼠腹部用脱毛剂去毛2cm后，在小鼠脱毛部位用无水乙醇清洗一次，再用脱氯水冲洗3次并用干净卫生纸吸干。将小鼠固定于木板架上·试验组按厂家推荐剂量涂抹待试药剂。在体式显微镜下应用针刺法取活动良好的尾蝴置于盖玻片上，40条/（片·鼠），置鼠脱毛部位分别感染小鼠15min后.将小鼠移人饲养盒内.分组常规饲养，同法感染对照组鼠。35d后按鼠解剖法解剖收集血吸虫虫体，计数检获成虫数.计算感染下降率和虫负荷下降率。重复三次。5.3模拟现场防蜘感染试验设待测药剂组和空白对照组各一组，每组10只，雌雄各半。将每组小鼠四肢、尾和鼠体1/2以下部位用脱毛膏脱毛后，用无水乙醇清洗一次，再用脱氯水清洗3次，对照组小鼠用脱氯水清洗脱毛部位3次。在待测组小鼠脱毛部位按厂家推荐剂量均匀涂抹待测药剂，将储物箱中分别注入（25土1)℃脱氯水30L.于鼠笼两侧各投人感染性钉螺10只/袋。1h后.分别将2组鼠笼固定于感染水体表层2cm处，使小鼠胸、腹部、四肢和尾部浸泡于水体，连续感染4h后，将小鼠移人饲养盒内分组常规饲养，35d后按常规解剖法解剖收集血吸虫虫体，计数检获成虫数，计算感染下降率和虫负荷下降率。重复三次。6数据统计与分析感染下降率按式(1)计算。P==(C-T)/N,×100(1)式中：P(-感染下降率，单位为百分率（%）；C对照组感染血吸虫的小鼠数量，单位为只；T实验组感染血吸虫的