SNT 2126-2008黑麦草腥黑穗病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2126—2008黑麦草黑穗病菌检疫鉴定方法Identification of Tilletia walkeri Castlebury and Carris2008-09-04发布2009-03-16 实施中华人民共和国发布非屋核的17童物真！国家质量监督检验检疫总局、数码防伪 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准黑麦草腥黑穗病菌检疫鉴定方法SN/T 2126—2008中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张 0.75　字数 16 千字2008年11月第次印刷2008年11月第一版印数 1 -2 000*书号：155066·2-19213 SN/T 2126—2008前 言本标准的附录 C 和附录 D 为规范性附录,附录 A 和附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：易建平、周国梁、黄国明、印丽萍。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2126—2008黑麦草腥黑穗病菌检疫鉴定方法范围1本标准规定了进出境植物检疫中黑麦草腥黑穗病菌（Tilletia walkeri)的检测和鉴定方法。本标准适用于进出境禾本科草种和粮谷类产品中黑麦草腥黑穗病菌的鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T18085—2000植物检疫：小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法3 缩略语下列缩略语适用于本标准。3. 1PCRPolymerase Chain Reaction聚合酶链式反应。3. 2DNA Deoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸。3.3dNTP Deoxyribonucleoside triphosphate脱氧核苷三磷酸。3.4bp base pair碱基对。3.5Taq 酶DNA聚合酶。3. 6EB溴化乙锭。4原理黑麦草腥黑穗病菌（Tilletia walkeri Castlebury and Carris)属真菌界（Fungi），担子菌门（Basidiomycota），黑粉菌纲（Ustomycetes），黑粉菌目（Ustilaginales），黑粉菌科（Filletiaceae），腥黑粉菌属（Tilletia）。被侵染的植株结实时,种子被病菌冬孢子侵占，形成菌瘿。冬孢子形态学特征和 PCR反应特性是鉴定该种病原菌的依据。地理分布和寄主范围参见附录 A。5仪器设备5. 1多功能显微镜。 SN/T 2126—20085.2体视显微镜。5.3低速离心机。5. 4往复式振荡器。5.5干热灭菌器。5.6高压灭菌器。5.7PCR仪。5.8凝胶成像系统。5.9实时荧光PCR仪5. 10生物培养箱。可调微量加样器（2.5μL～200 μL）。5.115. 12载玻片(长×宽为25.4 mmX76.2mm,厚0.8 mm)。5. 13盖玻片(18 mmX18 mm)。5.14网筛(孔径100 μm 和20 μm)。6药品试剂6. 1次氯酸钠溶液或漂白粉精片（化学纯）。6. 2吐温-20(Tween-20)。6.3席尔氏浮载剂（见GB/T18085一2000附录A）。6.4无荧光显微镜物镜镜头浸泡油（Nd=1.516）。6.5溴化乙锭(EB)。6.6封片剂：指甲油或阿拉伯树胶。6.7琼脂糖。6.8蛋白酶K。6.9RNA酶。6.10EDTA(0. 5 mol/L,pH8. 0) 。6.11TE(pH 8. 0).6. 12DNA Marker.6. 13无水乙醇。酚。6.146. 15三氯甲烷。6.16异丙醇。6. 17异戊醇。6.18 Taq DNA 聚合酶。7实验室检验7.1样品接收接收待检样品时，应核对记录，报检号、品名、批号、原产地、样品编号、送样员姓名、接样员姓名和接样日期。7.2制备平均样品在样品预备室内将待检样品在样品袋内充分混匀，制成平均样品，每样1kg。7.3样品洗涤检验7.3.1取样从平均样品中称取50g作为试验样品。2 SN/T 2126--20087.3.2洗涤离心试验样品倒人灭菌三角瓶内，加蒸馏水 100 mL，再加吐温-20 1滴～2滴，用铝铂纸或Parafilm膜封住三角烧瓶瓶口。将三角瓶放在往复式振荡器上振荡5min，洗涤液经过孔径100μm和20