SN_T 3380-2012出口动物源食品中硝基呋喃代谢物残留量的测定 酶联免疫吸附法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3380-2012出口动物源食品中硝基呋喃代谢物酶联免疫吸附法残留量的测定Determination of residues of nitrofuran metabolites in foodstuffs ofanimal origin for export-ELISA method2013-07-01实施2012-12-12 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3380-2012言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国常州出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国盐城出入境检验检疫局。本标准主要起草人：余兵、蔡宝亮、李东明、袁涛、袁芳、徐帮兴、丁涛11 SN/T 3380—2012出口动物源食品中硝基呋喃代谢物酶联免疫吸附法残留量的测定1范围本标准规定了出口动物源食品中四种硝基呋喃代谢物残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于鸡肉、猪肉、小龙虾-回鱼、牛奶蜂蜜等动物源食品中呋喃唑酮代谢物（AOZ)、呋喃它酮代谢物（AMOZ）)、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD)残留量的检测。2 原理本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应，整个方法包括四种硝基呋喃代谢物残留量的检测。在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的硝基呋喃代谢物残留物经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争相应的抗硝基呋喃代谢物的衍生物抗体-加人酶标二抗后-用TMB底物显色，样本吸光值与其所含硝基呋喃代谢物残留物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应稀释倍数即可得出样本中硝基呋喃代谢物残留物的残留量3试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离f水3.1 甲醇。3.2 乙酸乙酯。3.3正已烷。3.4乙腈。3.5浓盐酸。3.6氢氧化钠。3.7磷酸氢二钾。3.8：亚硝基铁氰化钾。3.9 硫酸锌。3.10对羧基苯甲醛。3.111 mol/L盐酸(HCI):取 8.6 mL浓 HCl加水定溶至 100 mL。3.120.1mol/L磷酸氢二钾（K²HPO,）：称22.8gK,HPO·3HzO加去离子水溶解定溶至1L。3.13亚硝基铁氰化钾(KzFe(CN)5·NO·3HzO)溶液：称12.5g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL.3.14硫酸锌（ZnSO4·7H²0)溶液：称29.8g硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 ml。3.15衍生化试剂(0.01mol/L对羧基苯甲醛溶液）：15.013mg对羧基苯甲醛用甲醇溶解并定容至10 m.3.16标准品：包括AOZ、AMOZ、SEM和AHD四种标准品，纯度≥99%。3.17标准溶液的配制：分别准确称取适量的AOZ、AMOZ、SEM和AHD四种标准品，用乙腈配成1 mg/mL标准储备溶液，于 4℃～8℃条件下保存。1 SN/T 3380—20123.18呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃它酮代谢物（AMOZ）、呋喃西林代谢物（sEM）、呋喃妥因代谢物（AHD)残留量检测试剂盒（参见附录A）。4仪器和设备4.1微孔板酶标仪：波长450nm/630nm。4.2均质器。4.3氮气吹干装置。4.4振荡器。4.5离心机:转速4000 r/min以上。4.6刻度移液管。4.7天平：感量0.01g。4.8微量移液器:单道 20 μl～200 μl,100 μl～1 000 μl、多道 250 μl。4.9洗板机。5试样的制备和保存5.1试样的制备从所取全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎、混匀，采用四分法，将样品分成两等份，装入洁净容器，加封并做标识。5.2试样的保存鸡肉、猪肉、小龙虾、回鱼等肉类样品放置于一20℃～－18℃条件下保存，蜂密和牛奶样品放置于4℃～8℃条件下保存。6测定方法6.1试样提取和净化6.1.1鸡肉、猪肉、小龙虾、回鱼等肉类样品用均质器均质样本，取1g±0.05g的均质样本，加人4ml.去离子水、0.5ml1mol/LHCl和100μL衍生化试剂，充分振荡，置于56℃环境中孵育2h或37℃过夜孵育（约16 h）。加人5ml0.1 mol/I.K²HPO4、0.4 ml1mol/L NaOH 和 5 mL乙酸乙酯,充分振荡 5 min,在室温下（20 ℃～25℃)4000r/min以上离心10min。取出2.5ml的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50℃氮气吹干。用1mL正已烷溶解干燥物，用1mL已稀释好的复溶液充分混合，在室温下4 000r/min以上离心10 min,取 50 μL下层相用于分析。6.1