SN_T 2124-2013大西洋鲑三代虫病检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2124-2013代替 SN/T西洋鲑三代虫病检疫技术规范Quarantine protocol for infection with Gyrodactylus salaris2013-03-01发布2013-09~16 实施中华人民共和国0发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2124—2013前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准参考了世界动物卫生组织（OIE)的《水生动物疾病诊断手册（2011版）》中2.3.03大西洋鲑三代虫病的有关章节，并结合了国内外的文献资料报道以及起草单位多年的检疫工作经验。本标准代替SN/T2124--2008《大西洋鲑鱼三代虫检疫技术规范》。本标准与SN/T 2124--2008相比，主要技术变化如下：一简化了形态学鉴定方法，不再将其作为种类判定的主要依据；删除了 IGS 序列 PCR鉴定方法;增加大西洋鲑三代虫结构图，标注其后吸器的结构，增加虫体消化及基于钩镰的种类鉴定方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫局。本标准主要起草人：吴绍强、林祥梅、刘、王彩霞、吕继洲、岳志芹、刘建、王建峰、张永宁、贾广乐、张曼、邓俊花。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 2124—2008。 SN/T 2124—2013大西洋鲑三代虫病检疫技术规范1范围本标准规定了大西洋鲑三代虫病检疫时的样品采集、形态学检查、聚合酶链反应（PCR)初筛以及种类鉴定方法。本标准适用于大西洋鲑三代虫病的检疫以及流行病学调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出人境动物检疫采样3缩略语下列缩略语适用于本文件。ITS:扩增内部转录间隔区(internal transcribed spacer)COI：线粒体细胞色素氧化酶I基因（mitochondrial cytochrome C oxidase I）4病原概述大西洋鲑三代虫（Gyrodactylus salaris)是引起大西洋鲑三代虫病的一种淡水胎生寄生虫。从形态上看，大西洋鲑三代虫与同属三代虫G.teuchis（主要寄生于褐鳟、大西洋鲑和虹鳟）和G.thymalli（主要寄生于河鳟）十分相似，容易彼此混淆，具体情况参见附录A。5材料除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯。试验用水要求达到GB/T 6682中一级水的要求。5.1苦味酸铵-甘油(APG)溶液:配制方法见附录B的B.1。5.2软组织消化液、消化终止液：配制方法见B.2、B.3。5.3裂解液：配制方法见B.4。5.4引物：浓度为10 μmol/L，其序列如下：ITS-up: 5′-TTTCCGTAGGTGAACCT-3ITS-1p:5′-TCCTCCGCTTAGTGATA-3CO I-up:5-TAATCGGCGGGTTCGGTAA-3CO I-1p:5-GAACCATGTATCGTGTAGCA-35.5PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶、DNA Marker、电泳上样缓冲液等，均为商品化试剂盒中成分。5.6电泳缓冲液：配制方法见B.5。1 SN/T 2124—20135.7 95%乙醇。5.8琼脂糖。6设备6.1解剖镜。6.2 生物显微镜。6.3通风操作台。6.4 PCR 仪。6.5电泳仪。6.6凝胶成像仪或紫外透射仪。7症状鱼体表寄生一条至数十条大西洋鲑三代虫时多无临床症状表现。中度以上感染时，由于鱼在其他物质表面摩擦皮肤导致体表有闪光点。后期由手休表渗出附着黏液而体表灰白，鳍，特别是腹部、尾部及胸部的鳍出现坏死。严重感染的鱼，多在静水处不愿活动。大西洋鲑三代虫病症状缺乏典型特征，不作为疫病判定依据8大西洋鲑三代虫形态学检查8.1　采样及固定符合GB/T18088的规定。严重感染时，刮取鲑体表或鳍部位的环蛇组织涂片镜检，可发现大量大西洋鲑三代虫。种类鉴定需要在实验室内结合镜检及PCR进街。在实验室中检查大西洋鲑三依虫时，应采集插鱼并放在原生括的水中运输，且一个容器只装运一种鱼。在冰中运输的死鱼不适宜作为沃西洋鲢三代虫的检查样品。如没有对活鱼进行现场检查条件：牵系后壶即将整鱼置于5%乙醇中固定保存（鱼和95%乙醇比例不超过1：9）。标本瓶应有足大空间。同时瓶口足够开鼠，以防放人、取出鱼时将虫体碰掉。瓶子应水平放置，以利于鱼体舒展至鱼体究金固定为止，镜下观察时可借镊子