SN_T 3624-2013出口食品中弓形菌的检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T口食品中弓形菌的检测方法Detemination of Acrobacter in food for export2013-08-30 发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局层查真 SN/T 3624—2013前本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：冯家望、游淑珠、王小玉、胡松楠、唐食明、邝筱珊、成晓维、郑立新。1 SN/T 3624—2013出口食品中弓形菌的检测方法1范围本标准规定了食品中弓形菌（Arcobacter）的检验方法。本标准适用于食品中布氏弓形菌、嗜低温弓形菌和斯氏弓形菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测GB/T27405实验室质量控制规范食品微生物检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1弓形菌Arcobacter弓形菌（Arcobacter），为变形菌门（Proteobacteria）ε-变形菌纲（Epsilonproteobacteria）弯曲菌目（Campylobacterales)弯曲菌科（Campylobacteraceae)的个新属。呈弯曲或螺旋形杆状，不产芽孢，最佳生长氧气浓度为微量氧气（3%～10%），正常大气氧浓度条件下也可生长的革兰氏阴性细菌。4生物安全措施为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测弓形菌，所有培养物和废弃物应参照GB19489、GB/T27403和GB/T27405中的有关规定执行。5设备和材料除微生物实验室常规灭菌与培养设备外，其他设备与材料如下：5.1 冰箱:2℃～8℃。5.2恒温培养箱:25℃±1℃,30℃±1℃,36℃±1℃。5.3水浴或其他恒温装置:30℃±1℃,98℃。5.4微需氧培养装置：提供微需氧条件（5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气）。5.5电子天平：感量0.1g。5.6均质器。5.7过滤装置及滤膜(0.22 μm,0.45 μm）。1 SN/T 3624—20135.8显微镜：10×～100×，有相差功能。5.9离心机：离心力≥20 000 g。5.10核酸蛋白分析仪。5.11基因扩增仪。5.12电泳仪。5.13凝胶成像分析系统。培养基和试剂6除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合（B/T6682中一级水的要求。6.1JM肉汤:见附录 A中 A.1。6.2 JM琼脂:见 A.2。6.3弓形菌琼脂：见 A.3。6.4布氏肉汤：见 A.4。6.5布氏琼脂：见 A.5。6.6氧化酶试剂：见A.6。三糖铁琼脂：见 A.7。6.76.8Hugh-Leifson 培养基:见 A.8马尿酸钠水解试剂：见 A.9。6.96.10吲哚乙酸醋纸片：见A.10。6.11Mueller Hinton 血琼脂:见 A.116.121mol/L.Tris-HCl缓冲液(pH8.0):称取 121h g Tris.溶于 800°ml.水中,搅拌，加人浓盐酸 42 mL、冷却至室温，用稀盐酸准确调整pH至8.0，分装后高压灭菌备用。6.130.5mol/LEDTA(pH8.0)在800mL水中加人186.ig、NaEDTA·2H,O,在磁力搅拌器剧烈搅拌，用氢氧化钠调节溶度pH值至8.0（约需20g氢氧化钠颗粒）、然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。6.14 DNA 提取液:量取 100 mL1 mol/L-Tris-HCl,50:ml. 0.5/nol/L, FDTA ,称取 5.0 g SDS.16.8.18 g 氯化钠,定容至1L，分装后高压灭菌备用。6.15引物：见表1。表1弓形菌扩增引物名称引物序列、扩增目的基因和扩增片段长度目的基因片段长度/bp引物序列引物名称 5′-AGAGATTAGCCTGTATTGTAT-3Acro I1 202马形菌属16SrRNAAcro II 5-ATGCATCCCCGCTTCGAATGA-3 5-GCYAGAGGAAGAGAAATCAA-3ArcoF2 061布氏弓形菌23SrRNAButR5-TCCTGATACAAGATAATTGTACG-3ArcoF 5GCYAGAGGAAGAGAAATCAA-3198斯氏弓形菌23SrRN