NY_T 1950-2010片形吸虫病诊断技术规范.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1950-2010片形吸虫病诊断技术规范Diagnostic techniques for fascioliasis2010-12-01实施2010-09-21 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1950--2010言前本标准遵照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。本标准起草单位：中国农业科学院兰州兽医研究所。本标准主要起草人：才学鹏、景志忠、王佩雅、郭爱疆、靳家声、骆学农、李辉。I NY/T 1950—2010片形吸虫病诊断技术规范1范围本标准规定了片形吸虫病(肝片吸虫病和大片吸虫病)临床诊断方法、病原检查方法和酶联免疫吸附试验免疫学诊断方法。本标准适用于牛、羊片形吸虫病的诊断、流行病学调查及检疫2临床诊断方法牛、羊患本病时多呈慢性型，主要症状为体态消瘦，食欲减退，颌下、前胸、下腹部水肿,贫血,结膜与口黏膜苍白，生长受阻，产奶量降低，孕畜可能流产。急性型仅偶见于羊，可出现微热，肝脏浊音区扩大，肝部有压痛,有时突然死亡。病理变化:在急性型时,可见到急性肝炎,肝肿大,包膜有纤维素沉积,有2 mm～5mm 长的暗红色虫道,内有凝固的血液和很小的童虫，常伴有腹膜炎。慢性型时，主要呈现慢性肝炎和慢性胆管炎。早期肝脏肿大，以后萎缩硬化，小叶间结缔组织增生，胆管扩张、肥厚、变粗，呈绳索样突出于肝脏表面。胆管内壁有盐类沉积，内膜粗糙，切时有沙沙声,在牛多见。本病呈地方性流行，多发生在有中间宿主椎实螺的低洼和沼泽地带的放牧地区。以多雨年份特别严重。感染季节多在夏、秋两季,秋末及冬季发病较多，在温暖和多雨地区则要早些。肝片吸虫在我国各地均有分布，主要感染牛、羊；而大片形吸虫偏于热带或亚热带分布，在我国多发生在南方地区，以感染牛特别是水牛为多见，山羊等亦有感染。3病原检查3.1虫卵检查诊断方法3.1.1水洗沉淀法(或称彻底洗净法)材料200mL玻璃杯，60目铜丝筛，玻璃棒，镊子，胶帽吸管，载玻片和盖玻片，天平，显微镜3. 1. 1. 2方法取新鲜粪便10g放人玻璃杯中，先加10mL水搅成糊状，然后再继续加水20倍。经充分混合后，用60目铜丝筛网滤入另-玻璃杯中，把滤过的粪便混悬液静置沉淀30min后，倒掉上清液，再继续加水混合，静置沉淀。静置的时间可逐渐缩短，但至少要10 min。这样反复进行，直到上清液透明为止。最后吸取沉淀物放在载玻片上，加盖玻片在显微镜下作定性检查。若作定量检查,须将所有沉淀物全部镜检(不加盖玻片，用低倍显微镜检查），统计全部虫卵数。或按3.1.2进行定量检查。结果判定肝片形吸虫(Fasciola hepatica)虫卵呈长卵圆形,大小为 116 μm～132 μm×66 μm～82 μm(长×宽）,黄褐色。前端较窄,有一个不明显的卵盖,后端较钝。卵壳较薄而透明，卵内充满卵黄细胞和一个胚细胞(参见图 A.1)。大片形吸虫（Fasciola gigantica）虫卵的形态与肝片形吸虫虫卵相似，卵呈深黄色，大小为150 μm～190 μmX75 μm～90 μm(长×宽)(参见图 A.2)。片形吸虫虫卵与前后盘吸虫(（Paramphistomum)虫卵的形态和大小相似，鉴别要点为：前后盘吸虫1 NY/T 1950—2010虫卵呈灰白色,有透明感，卵黄细胞松散地分布在卵内，可见到许多空隙。3.1.2片形吸虫虫卵定量计数法材料300mL带刻度的三角烧瓶，1.6%氢氧化钠溶液,玻璃棒，10mL吸管，10mL离心管,离心机，饱和盐水，胶帽吸管，镊子，天秤，载玻片和盖玻片，显微镜。3. 1.2.2 方法羊：称取羊粪10g，放人300mL容量的三角烧瓶中，加人20mL1.6%浓度的氢氧化钠溶液(B.1），静置过夜。次日，将粪块搅碎，再加人1.6%的氢氧化钠溶液到300mL刻度处。再充分摇匀，立即用吸管吸取粪液7.5mL注人离心管内，放离心机内以1000r/min速度离心2min，倾去上层液体，换加饱和盐水（B.2），再次离心后，再倾去上层液体，再换加饱和盐水，如此反复操作，直到上层液体完全清澈为止。倾去上层液体后，加清水洗涤，沉淀后弃上清，将沉渣全部分滴于数张载玻片上，用低倍显微镜检查全部所制的载玻片，统计片形吸虫虫卵总数，以总数乘以4，即为每克粪便中的片形吸虫虫卵数(EPG)。牛：操作步骤基本同上，但用粪量改为30g,加人50mL1.6%的氢氧化钠溶液静置过夜。次日，将粪块搅碎,再加人1.6%的氢氧化钠溶液到300mL刻度处。加人离心管中的粪液量为5mL，最后计得片形吸虫虫卵总数乘以2，即为每克粪便中的片形吸虫虫卵数（EPG)。在片形吸虫病诊断中，当牛每克粪便中