SN_T 4251-2015出口贝类中原多甲藻酸类贝类毒素的测定 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4251—2015出口贝类中原多甲藻酸类贝类毒素的测定液相色谱-质谱/质谱法Determination of azaspiracid shellfish poison residues in shellfish for export-LC-MS/MS method2015-05-26发布2016-01-01实施中华人民共和国a发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4251—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，符合SN/T0001和《进出口食品化妆品检验专业标准体系》。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑秋月、孙兴权、曹际娟、那晗、肖珊珊、李一尘、张丕桥、王刚。1 SN/T4251—2015出口贝类中原多甲藻酸类贝类毒素的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了出口贝类中原多甲藻酸类贝类毒素（AZA1，AZA2，AZA3）残留量测定的液相色谱质谱/质谱测定方法。本标准适用于扇贝、牡蛎和杂色蛤等贝类中原多甲藻酸类贝类毒素（AZA1，AZA2，AZA3)残留量的定量测定和确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样用80%甲醇溶液提取，提取液经正已烷脱脂、三氯甲烷再萃取并旋转蒸发浓缩后，固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T.6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙睛：色谱纯。4.3甲酸：色谱纯。4.4正已烷。4.5三氯甲烷。4.6乙酸钠（CH,COONa·3H,O)。4.780%甲醇溶液：量取800mL甲醇，加水至1000mL，混合均匀。4.850mmol/L乙酸钠溶液；称取6.80g乙酸钠（4.6)，加水溶解并定容至1000mL，混合均匀。4.9淋洗液：量取950mL50mmol/L乙酸钠溶液（4.8），加甲醇定容至1000mL，混合均匀。4.10洗脱液：量取98mL甲醇，加2mL甲酸（4.3），混合均匀。4.110.1%甲酸溶液：取1mL甲酸（4.3），用水稀释至1000mL。4.12原多甲藻酸标准品：AZA1、AZA2和AZA3标准品纯度均大于等于95%，标准品信息见附录A中表A.1。4.13原多甲藻酸标准储备溶液：取适量标准品（4.12)，分别用甲醇溶解稀释，配制成浓度为90ng/mL的标准储备溶液，于一1.8℃避光保存。1 SN/T4251—20154.14混合标准储备液：分别吸取适量的AZA1、AZA2和AZA3标准储备液（4.13），用甲醇配制成混合标准储备液，使得混合标准储备液中AZA1、AZA2和AZA3的浓度均为30ng/mL。于-18℃避光保存。4.15混合标准工作液：根据需要用甲醇将混合标准储备液（4.14）逐级稀释，配成浓度为0.0ng/mL，0.3ng/mL，1.2ng/mL，2.4ng/mL，30ng/mL的一系列混合标准工作液，于4℃避光保存。4.16固相萃取柱：混合型阴离子交换固相萃取柱，150mg，6mL，或相当者。4.17微孔滤膜：0.22μm，有机相。5仪器和设备高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源5.15.2分析天平：感量为0.01g。5.3组织捣碎机。5.4均质器：最高转速10000r/min。5.5高速冷冻离心机：转速可达8000r/mi5.6#涡旋混合器。5.7固相萃取装置。5.8鸡心瓶：150mL。5.9螺纹帽离心管：聚丙烯，50ml5.10容量瓶：10mL。6试样制备与保存6.1试样的制备壳，再清洗壳内组织，去除海水和泥沙等杂质。取代表性试样的将贝类试样外壳用净水清洗后碎机充成均质处理，均分成2份，分别装人洁净容器中，密可食部分约500g作为试样，用分捣碎组织n，备用待测。封，并标明标记。提取分析前取0Q6.2试样的保存试样于一18℃下冷冻避光存放。试样制备与保存过程中应防止试样受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤7.1提取称取2g试样（精确到0.01g）置于50mL离心管中，加人80%甲醇溶液（4.7）8mL，涡旋提取2min，4℃下以8000r/min离心5min，转移上清液于另一离心管中，残渣中加入80%甲醇溶液8mL重提一次，合并上清液。提取液中加人正已烷5mL，1500r/min涡旋提取1min，静置分层后去正已烷层。提取液中再加人三