NY_T 3258-2018油菜品种菌核病抗性离体鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.01B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3258—2018油菜品种菌核病抗性离体鉴定技术规程Technical code of practice for in vitro identification of resistance toSclerotinia Sclerotiorum in oilseed rape2018-07-27 发布2018-12-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3258—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由农业农村部农产品质量安全监管司提出。本标准由农业农村部种植业管理司归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所本标准主要起草人：伍晓明、李利霞、陈碧云、闫贵欣、高桂珍一 NY/T 3258-2018油菜品种菌核病抗性离体鉴定技术规程1范围本标准规定了油菜菌核病抗性离体鉴定方法。本标准适用于油菜菌核病室内抗病鉴定。本标准不适用于油菜季节性和形态学(如无花瓣油菜)避病的抗病鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T3068／油菜品种菌核病抗性鉴定技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1油菜菌核病Sclerotinia stem rot of oilseed rape由病原物核盘菌[Sclerotiniasclerotiorum（Lib.）deBary]引起的油菜真菌病害（参见附录A）。3. 2离体人工接种抗病性鉴定invitro artificial-inoculationresistance identification将器官或部分组织从植物体取下，按一定量接种人工培养病原物，仿照自然环境，创造发病条件，根据接种植物器官或部分组织的发病程度确定供试材料抗性级别的一种方法。3. 3病情指数disease index反映群体抗性程度的综合指标，按式（1)计算。(sXn)DI =X 100(1)NXSi式中：DI病情指数；各单株病情级别数值（0、1、2、3、4）；s对应各病情级别的株数，单位为株；nN调查总株数，单位为株；S1最高病情级别的数值。3. 4相对抗性指数relativeresistanceindex反映群体较对照群体抗性减轻程度的综合指标，按式（2)计算。(100- DIck)-(100-DIRRI =- In(1n(2)DIckDI式中：RRI相对抗性指数；1 NY/T 3258--2018DIck——抗病对照的病情指数；DI—待评价品种(系)的病情指数。4试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1水GB/T6682，三级，4.21mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液称取40.0g氢氧化钠，溶于800ml.水中，冷却至室温。4. 331mol/L盐酸(HCI)溶液量取50ml.浓盐酸（36%～38%）加人到体积为450ml的水中，混匀。4.470%乙醇溶液量取700ml95%乙醇，加水定容至950mL，混匀。4. 551%次氯酸钠溶液量取10ml有效氯含量10%的次氯酸钠原液加人到体积为90ml.的水中，混匀。5仪器设备5.1电子天平感量0.01g。5.2恒温培养箱精度土1℃。5.3人工接种鉴定温室温度可调节至（22士1）℃，相对湿度可调节至（95士5）%。6核盘菌接种体制备6.1核盘菌接种体培养基制备核盘菌生长培养基用市售马铃薯培养基（PDA，PotatoDextroseAgar）粉剂，按说明书标准用量的一半，并按每升培养基补加7.5g琼脂粉，加水溶解，定容至1000ml，用1mol/LNaOH或1mol/IHCl溶液调节pH至5.8。之后，将溶液分装到三角瓶中，包扎好后121℃灭菌20min取出，按20mL/皿倒平板（直径90mm培养皿），冷却后储存备用。6.2核盘菌菌核的采集和消毒从田间直立的油菜菌核病发病植株体内剥离核盘菌菌核，选择颗粒饱满、无裂痕、无霉变的菌核放人洁净的容器中，带回实验室置于一20℃冰箱备用。在超净工作台上，将菌核置于70%乙醇中浸泡1min，再转人1%次氯酸钠溶液中浸泡3min，之后用无菌水漂洗3次。6.3核盘菌菌丝的扩繁在超净工作台上，将已消毒的菌核切成2mm×2mm（长×宽）的小块。用镊子取一个菌核切块置于培养皿中心，并使其切面紧贴培养基表面，封皿后（22士1）℃暗培养。萌发菌丝后，4℃保存，并将此培养基用作菌源。离体接种前5d，用直径5mm的打孔器沿菌源培养基菌丝边缘打孔。将打孔得到的菌丝块取出置于新的培养基中心，并使菌丝块有菌丝一面紧贴于新的培养基表面，封皿后（22士1