SN_T 4278-2015国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4278—2015国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程Protocol for DNA barcoding identification techniques of medical insectat frontier ports2016-01-01实施2015-05-26发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局查真伪 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程SN/T4278--2015*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张1.25字数34千字2016年2月第一版2016年2月第一次印刷印数1-1100*书号：155066·2-29572 SN/T4278—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检疫局。本标准主要起草人：岳巧云、邱德义、聂维忠、李云松、陈健、刘德星、魏晓雅、吴可量、胡佳。 SN/T4278—2015引言DNA条形码技术是近年来发展起来的---种建立在基因扩增和序列比对基础之上新的物种鉴定技术，利用生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段进行物种鉴定。该技术不受物种发育状态、雌雄性个体及形态特征完整性与否的限制，具有快速、准确、低成本等特点。2003年，加拿大学者PaulHebert等发现线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因片段能够提供一种快速、简便与可信的分类方法，可以准确地区分物种，并首次提出DNA条码（DNABarcoding）的概念。2010年，由26个国家合作成立了国际生命条码联盟（iBOL），致力于将DNA条形码技术发展成为通用的一种高效、准确的物种鉴定方式，目前全球已经有超过50个国家参加此联盟，目的是构建全球物种分子鉴定平台。BOLD生物条形码数据系统（Barcodingof lifedatasystem）作为国际条形码组织的专用数据库及鉴定平台，对DNA条形码及凭证标本的筛选有着严格的要求，如：必须有唯一性标本编号、存放、鉴定以及采集（采集人、带GPS定位信息的采集地点的经纬度）等详细信息，要求基因片段必须大于500bp、提供所使用的PCR引物序列、测序图谱、原始序列等追踪档案。目前BOLD系统中已经包含超过20万种生物的DNA条形码序列，而且正以很快的速度增长。对于涉及国境口岸卫生安全的医学媒介昆虫鉴定而言，一般利用长度约为658bp的CO1基因作为标准的DNA条形码序列，跟BOLD、NCBI系统等数据库进行比对。本标准主要起草人多年来一直从事DNA条形码鉴定工作，实验室近年已原始积累了300多种媒介昆虫的DNA条形码数据5000余条，具有丰富的利用DNA条形码技术进行物种鉴定的经验。本标准根据国际生命条码联盟（iBOL)对DNA条形码的规定，结合国境口岸媒介监测工作的特点而制定，以推动和规范全国各地检验检疫机构利用DNA条形码技术鉴定医学媒介昆虫的实验室操作，从而达到获得准确可靠结果的目的。I SN/T4278—2015国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程1范围本标准规定了医学媒介昆虫DNA条形码鉴定中的标本处理、基因扩增、序列分析、比对鉴定及结果判定等操作程序和规范。本标准适用于检验检疫机构在国境口岸利用DNA条形码技术对成虫（包括肢体残缺不全的成虫）以及蛹、幼虫和卵等依靠形态无法直接鉴定的医学媒介昆虫的种类鉴定工作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR)技术的应用3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1DNA条形码DNAbarcode生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段。DNA条形码已经成为物种鉴定的重要工具，在医学媒介昆虫中，一般是指线粒体COI（线粒体细胞色素C氧化酶亚基1）上的658bp的标准片段。3.2DNA条形码鉴定技术DNAbarcodingidentificationtechnique一种利用D