SN 1375-2004玉米细菌性枯萎病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1375—2004玉米细菌性枯萎病菌检疫鉴定方法Methods for quarantine and identification ofPantoea stewartii (Smith) Mergaert et al.2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和国发布[数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1375—2004前言本标准的附录 A、附录 B为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口，本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：魏亚东、黄国明、刘跃庭。本标推系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1375—2004引言玉米细菌性枯萎菱病(Stewarts Bacterial Wilt of Corn)是玉米上的一种毁灭性的病害,我国尚无该病害发生。该病可以通过带菌种子远距离传播(种传）,在病区则以昆虫传播为主。其病原菌 Pantoeastewartii（Smith）Mergaert et al.，异名：Erwinia stewartii（Smith）Dye,中文名称：斯氏泛菌。在1992年农业部颁布的《中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录》中，被列为一类危险性有害生物。为保护我国农业生产，防止玉米细菌性枯菱病传入我国，做好进境植物检疫工作，规范并正确掌握该病菌的检疫鉴定方法,特制定本标准。 SN/T 1375—2004玉米细菌性枯萎病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了进境植物检疫中玉米细菌性枯萎病菌的检疫和鉴定方法。本标准适用于进境种用及其他用途玉米中玉米细菌性枯萎病菌的检疫和鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标推，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。! :GB/T 4789.28—1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3原理3.1玉米细菌性枯萎病菌的分类地位玉米细菌性枯菱病菌 Pantoea stewartii(Smith）Mergaert et al.，异名:Erwinia stetwartii(Smith)Dye，属原核生物总界 Procaryotae细菌界 Bacterium，薄壁菌门 Gracilicutes，肠杆菌科 Enterobacteri-aceae,泛菌属 Pantoea。为兼性厌氧杆菌,革兰氏阴性,大小为 0.4 μm～0.7 μm 乘 0.9 μm～2.0 μm，无鞭毛,两端钝圆,单生或以短链形式存在。该病菌在玉米上引发的玉米细菌性枯萎病是一种典型的维管束病害，此病害为种传，带菌种子是其远距离传播的主要因素。3.2检疫原理酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫吸附分离试验利用血清学技术具有特异性强的优点，与常规生理生化鉴定技术协同应用于玉米种子中P.stewartii 的检测、分离和鉴定，具有快速、灵敏、有效且结果准确的特点，适合对玉米种子中P.stetuarti的检疫鉴定。4仪器、设备小型粉碎机、超净工作台、天平、恒温培养箱、高压灭菌锅、生物显微镜、酶标仪、洗板器、酸度计、高速冷冻离心机、可调移液器、聚苯乙烯塑料培养血等。5药品、试剂、培养基检验中所需的药品均为分析纯。5.1药品! :碳酸钠（NazCO：）、碳酸氢钠（NaHCO;）、磷酸氢二钠（Na²HPO·12H,O）、磷酸二氢钾（KH,PO4）、氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCI）、氯化钙（CaCl²）、吐温-20（Tween-20）、磷酸氢二钾（K,HPO4）、硫酸镁（MgSO4·7H2O)、双氧水（H²O2）、四甲基联苯胺、二甲基亚砜、蛋白陈、蔗糖（CizH2O1）、抗坏血酸(C。H:O。）、A蛋白(SPA)、酶标记 A蛋白（HRP-SPA)、升汞(HgCI)或次氯酸钠(NaOC1)、95%乙醇(CH;CH2OH)等。1:5.2试剂革兰氏染色液、鞭毛染色液。！5.3培养基改良W氏培养基。制作方法见附录 A。 SN/T 1375—20046 对照菌株和抗血清阴、阳性对照菌。其中阴性对照菌可选用除 P.stewarti 以外的、不同种的细菌菌株，一般为同属不同种的菌;革兰氏染色中的阴性对照菌为大肠杆菌（Escherichia coli）。对照菌在应用中需配制成10°cfu/mL浓度的菌悬液。检验中所需抗体均为同种 P.stewartii抗血清，其使用浓度依其效价而定。7 玉米细菌性枯萎病菌 P.stewartii 的检测、分离及鉴定7.1检验样品的制备从待检样品中挑选不成熟的、皱缩的、有穗轴的及色泽较