SN_T 2616-2010国境口岸鼠携带鼠疫杆菌和汉坦病毒快速检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2616—2010国境口岸鼠携带鼠疫杆菌和汉坦病毒快速检测方法Rapid detection of Yersinia pestis and Hantavirus on rodents at frontier port2010-05-27发布2010-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2616—2010言前 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人：胡孔新、史蕾、赵大力、杨鹏飞、平芮巾、王静、孙肖红、杨宇、张乐。 SN/T 2616--2010国境口岸鼠携带鼠疫杆菌和汉坦病毒快速检测方法1范围本标推规定了口岸捕获鼠所携带鼠疫杆菌和肾综合征出血热汉坦病毒（I型和ⅡI型）病原快速检测方法，包括样本病原检验材料的采集与保存、病原抗体和核酸快速检测及结果的分析与判读。本标准适用于对鼠携带鼠疫杆菌和汉坦病毒（I型和Ⅱ型）的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1280国境口岸鼠疫检验规程SN/T1552国境口岸生物因子恐怖事件监测规程WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则2005年全国肾综合征出血热监测方案（试行）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1肾综合征出血热hemorrhagicfeverwithrenal syndrome由布尼亚病毒科汉坦病毒属主要由I型和Ⅱ型汉坦病毒引起的、以鼠类为主要传染源的一种对人类生命健康有严重危害的常见自然疫源性疾病。典型临床表现为发热、出血、休克、肾脏损伤等。4生物安全防护要求4.1排查前做好个人防护。防护方法和标准见SN/T1552。4.2实验室应遵循GB19489和WS233对生物安全2级（BSL-2)实验室的生物安全要求。4.3使用过的实验用品应邀照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。5检验对象入出境交通工具、运输设备、货物、行李、邮包等藏和捕获的及口岸区域捕获的鼠类（包括其他鼠型动物）。6准备6.1实验室生物安全防护二级（BSL-2或P2)或以上实验室和相应的配套设施。 SN/T2616--20106.2主要仪器现场采血、解取材送检所需的常用器材包括：a）一次性无菌的5ml～10mL注射器和针头；b)无菌的动物解剖用器械，动物解剖台；c)无菌的组织容器及低温（干冰）冷藏送检装置、液氮运输罐；d)带盖白瓷缸、酒精灯；e)超低温冰箱（一80℃）、液氮储存罐、普通冰箱；1)1.5mLEP管、研磨棒、玻璃研磨器、玻璃吸管、量筒、三角烧瓶、试剂瓶；g)微型混合器、涡旋振荡器：h)电热干烤、高压蒸汽灭菌器：i)可调式微量加样器及塑料柔吸头；j)水浴箱；k)高速台式离心机；1)PCR扩增仪；m)电泳仪及电泳槽等；n)凝胶成像分析系统仪或紫外投射仪；o）酶联免疫检测仪、洗板机。6.3主要试剂及配制参见附录A。7样品采集、处理与转运7. 1样品鉴定分类将捕获的应检鼠分类鉴定并编号登记，单只裝人小希袋内，处死后，练净体外寄生虫，然后常规解剖并采集待检样本。7.2采样滤纸条准备将Whatman3号或相同材质滤纸浸入0.01%硫柳汞溶液中，，然后彻底干燥后切成5cm×1cm滤纸条，装人塑料袋中备用。7.3血样采集取分类鉴定的鼠，无菌解，在取鼠肺的同时，用滤纸条（5cm×］cm）沾取鼠i，如血样较少可在鼠胸腔内适量滴加生理盐水浴液后，再以滤纸条沾取，沾血滤纸阴于后用塑料袋包好放人冰箱中冷冻保存备用（血样干燥彻底，也可在常温保存数周而不影响抗体检测）。7.4组织采样7.4.1用于鼠疫杆菌检测捕获动物：原则上只采取肝、脾或有病变的组织进行检查。1)Whatman3号滤纸为英国沃特要公司提供产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者.并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2 SN/T2616-2010自毙、染病萎靡动物：按常规方法解剖后，分别观察肝、脾、肺、心等有无病变，并取相应材料作细菌学检查，使用的器械每用一次应进行消毒；腐败动物：多采取骨髓和脑组织作检查。以无菌操作法采取捕获鼠的肝、脾等部位的组织，分别置于灭菌冻存管内保存。7.4.2用于汉坦病毒检测采集鼠的肺脏，分别置于无菌冻存管中在液氮罐内保存。7.5实验样品转运实验样品转运过程应邀循下列原则！所有需要转运的实验样品应存放在液氮罐中并