SN_T 3730.1-2013食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第1部分：貂成分检测 实时荧光PCR法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.1-2013食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第 1部分：貂成分检测实时荧光 PCR法Identification of domestic animal ingredient in food and feed-Part 1 : Detection of martes ingredient-Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3730.1—2013前言SN/T3730《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法》共分为以下8个部分：第1部分：貂成分检测实时荧光PCR法；第2部分：狗成分检测实时荧光 PCR法；第3部分：狐狸成分检测实时荧光 PCR法；一一第4部分：驴成分检测实时荧光PCR法；第5部分：马成分检测实时荧光 PCR法；第6部分：猫成分检测实时荧光 PCR法；-第7部分：水牛成分检测实时荧光PCR法；第8部分：猪成分检测」实时荧光 PCR法。本部分为SN/T3730的第1部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、宝生物工程大连）有限公司。本部分主要起草人：郑秋月、李晶泉、于灵、张浩、赵昕、封雪、徐君怡、吴亚君。I SN/T 3730.1—2013食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第1部分：貂成分检测　：实时荧光 PCR 法1 范围SN/T3730的本部分规定了食品及饲料中貂成分鉴定的实时荧光PCR法。本部分适用于食品及饲料中貂成分，包括水貂（Mustla_vison）紫貂（Martes zibellina）、日本貂(Martes melampus）、黄喉貂(Martes flauigula）等的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1貂 Martes食肉目鼬科动物，属珍贵毛皮动物。本部分中貂成分即指水貂、紫貂、日本貂、黄喉貂等特异性DNA片段。3.2实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.3Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris：三（羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl）aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Er Taq HS:高效热启动 DNA聚合酶OD:光密度值(optical density) SN/T 3730.1--20135方法提要提取样品DNA，以DNA为模板，分别采用貂成分的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，进行食品和饲料中貂成分的鉴定。6试剂和材料除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物（对)序列和探针：貂成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分）引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针称名目的基因序列(5′-3)内参照5端引物TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照3端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT真核生物18SrRNA基因内参照探针FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-Eclipse貂5端引物TAGCRAAGAGACCTTAAG紫貂、日本貂、黄喉貂貂3端引物CTRYAAGTCTTYTCACTA16s rRNA 基因貂探针FAM-AACCAGACGAGCTACCTATGAG-Eclipse水貂5端引物 GCTTCAATCCTCTATTTCATAA水貂线粒体细胞水貂3端引物GCTTCTTCCTTGAGTCTTA色素b基因水貂探针FAM-CCTCCTAGTCTTCATGCCAATCGT-Eclipse6.2