SN_T 2664-2010蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法 放射受体分析法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2664--2010蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法放射受体分析法一Determination of tetracyclines residues in royal jelly for import andexport--Radio-receptor assay method2011-05-01实施2010-11-01 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局30x SN/T 2664-2010言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张晓峰、陈笑梅、朱振江、施伟良、方莹。 SN/T 2664--2010蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法　放射受体分析法1范围本标准规定了蜂王浆中四环素类抗生素残留的放射受体分析(Charm Ⅱ)方法。本标准适用于蜂王浆中四环素、金霉素、土霉素、强力霉素抗生素残留总量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要放射受体分析(Charm I)方法的基础是药物功能团与微生物受体位点的结合反应,这些位点与某一类种抗生素的共有功能团相关。应用受体的这种特异性可以实现对某一类抗生素的多残留分析。本方法中,样品中残留的四环素类药物经提取、稀释后与[H标记的金霉素共同竞争结合特异的受体位点。在一定温度下反应后，离心分离，清除未结合的四环素类药物,最后加人闪烁液,测定[H衰变发出的β粒子放射性量值,计数 cpm(count per minute）。测得的 cpm值与样品中四环素类抗生素残留量成反比。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1四环素类检测试剂盒1’：4.1.1 组织阴性对照浓缩干粉:组织阴性对照浓缩干粉储存于 2℃～6℃。4.1.2MSU 多抗标准品浓缩干粉:浓缩干粉储存于 2℃～6 ℃。4.1.3组织萃取缓冲溶液(MSU萃取缓冲溶液)干粉：储存于2℃～6℃。4.1.4M2缓冲溶液干粉:用于调节 pH值,储存于 2℃～6℃。4.1.5四环素类受体药片：白色，一15℃以下的条件保存。4.1.6四环素类氛标记药片：橙色，一15℃以下的条件保存。4.2组织阴性对照溶液：使用时取组织阴性对照浓缩干粉(4.1.1)按试剂盒说明书配制成阴性对照溶液。配制好的溶液可在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存48 h。如长时间不用，可将溶液保存于－15℃以下的冰箱中,使用时将其解冻。再解冻的溶液在2℃～6℃冰箱中可保存24 h。4.3MSU多抗标准溶液：使用时取浓缩干粉（4.1.2)按试剂盒说明书配制成多抗生素标准溶液。溶液的保存方法同 4.2。1）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，需经实验评估后使用这些等效产品。1 SN/T 2664—20104.4组织萃取缓冲溶液(MSU萃取缓冲溶液）：使用时取浓缩干粉（4.1.3)按试剂盒说明书配制成组织萃取缓冲液。可在2℃～6℃下保存2个月。4.5M2缓冲溶液：使用时取浓缩干粉(4.1.4)按试剂盒说明书配制成组织萃取缓冲液。可在2℃~6℃下保存2个月。4.6OptifluorR 闪烁液。4.7阴性对照液:取2 mL 组织阴性对照溶液（4.2),加至6mL组织萃取缓冲溶液（4.4)中制成阴性对照液,在室温下混匀,该对照液可在室温下保持 6 h 以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。4.8阳性对照液：取 0.3mL多抗标准溶液（4.3）,加至15mL组织阴性对照溶液中（5.2)，混匀;然后从中取 0.3mL混合溶液加人到 6mL MSU萃取缓冲溶液（4.4)中制成阳性对照液（金霉素浓度4ng/mL)；在室温下混合均匀。该对照液可在室温下保持_6.h.以上此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。4.950%甲醇水溶液(1+1,体积比）：100mL甲醇溶解于100mL水4.10氢氧化钠溶液(1mol/L):40g-氢氧化钠溶解于1000mL水。4.11 pH试纸:范围 5～10。4.12空白基样：选取确认不含有四环素族抗至素的蜂王浆，作为空白基样，用于测定当次批次试剂盒的控制点使用。5 仪器5.1Charm Ⅱ 7600 分析仪或相当者5.2孵育器。5.3 离心机。5.4均质器。5.5 移液器:10 μL～100 μL,10 μL～1 000 μL和 2 mL～10 mL5.6涡旋混合器。5.7 电子天平:0.01g～1