SN_T 3027-2011出口蜂王浆中氟喹诺酮类残留量测定方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3027—2011出口蜂王浆中氟喹诺酮类残留量测定方法酶联免疫法Determination of fluoroquinolones residues in royal jelly for export-Enzyme-linked immunosorbent assay2011-09-09 发布2012-04-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 3027-2011前言本标准依照GB/T1.12009 的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张晓峰、朱振江、吴栅、帅江冰、陈笑梅。- SN/T 3027—2011出口蜂王浆中氟喹诺酮类残留量测定方法酶联免疫法1 范围本标准规定了蜂王浆中氟喹诺酮类残留量的酶联免疫测定方法本标准适用于蜂王浆中那氟沙星、芦氟沙星、达氟沙星、恩诺沙星、盐酸环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙、二氟沙、沙拉沙星和依诺沙星残留总量的測定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理以高氯酸来沉淀蜂王浆的蛋白,并提取蜂王浆中残留的氟喹诺酮类药物。微孔板中包被有诺氟沙星抗体，加人结合辣根过氧化酶的诺氟沙星（酶标记诺氟沙星）、诺氟沙星标准品或样品提取液后，标准溶液中的诺氟沙星或样品中的氟喹诺酮类和酶标记诺氟沙星竟争性地与诺氟沙星抗体结合。通过洗涤除去未结合的试剂，然后加人底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中氟喹诺酮类的含量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的～级水。4.1Randox 氟喹诺酮类检测试剂盒1)4.2诺氟沙星酶标记物溶液：根据氟喹诺酮类试剂盒中说明，用酶标记物稀释液（参见附录 A)将诺氟沙星酶标记物浓缩液（参见附录A)溶解，混匀后备用。4.3稀释洗涤缓冲液：根据氟喹诺酮类试剂盒中说明，将稀释洗涤缓冲液浓缩液(参见附录 A)加970 mL水稀释，混匀后备用。4.4磷酸：分析纯。4.5 NaCl:分析纯。4.6甲醇:分析纯。4.730%氢氧化钠:30 gNa0H溶于水中，用水定容至100 mL。4.86%高氯酸:取 6 mL高氯酸用水定容到100 mL。1）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，需经实验评估后使用这些等效产品。 SN/T 3027-—20114.910%甲醇:10 mL甲醇(4.6)用蒸馏水定容至100 mL。4.10HLB 固相萃取小柱:Oasis,3 mL(60 mg),Waters。4.11诺氟沙星标准物质:纯度≥98%。4.12诺氟沙星标准品溶液：用乙睛作为溶剂配制成100ng/mL的储存液，于一20℃条件下保存。4.13空白样品：选用已确切知道不含有氟喹诺酮类抗生素的蜂王浆样品，作为空白样品，用于随样测试的加标监控实验。5仪器5.1 酶标仪。5.2 8 道移液器:10 μL～100μL。5.3单道移液器:10 μL～100 μL,100 μL～1000 μL和 2mL～10 mL。5.4混合振荡器。5.5高速冷冻离心机：6000r/min。5.6固相萃取装置。5.7 氮吹仪。5.8具塞试管:50 mL。5.9 电子天平:0.01g～100g。6试样的制备与保存6.1试样的制备原始样品总量不得少于500g，采用四分法，将样品分成两等份装人洁净容器，加封并做标识。6.2试样的保存将样品于一20℃～一18℃条件下保存。7 分析步骤7.1　提取称取2g蜂王浆样品，精确到0.1g，置于 50 mL具塞试管中,加入8mL 6%高氯酸（4.8），充分混匀，15℃条件6000r/min离心10min直至清亮，取5mL上清液于一干净试管，加人0.5gNaCl1(4.5），混匀后3000r/min离心5min，取3mL上清液于一干净试管，用30%氢氧化钠（4.7)或磷酸（4.4）调pH至4.0～8.0。HLB小柱(4.10)先依次用1mL甲醇(4.6)和1mL蒸馏水活化，吸取2.5mL试样溶液过柱，3mL水洗，1mL10%甲醇（4.9)洗柱，用负压去除残留的液体，并且在弱空气或氮气吹2min干燥柱子。用2mL甲醇(4.6)洗脱，将样品收集于一干净试管，氮气吹干，以1mL稀释洗涤缓冲液（4.3)溶解残留物，调节 pH 至 7.0,供 ELISA检测用,最后稀释倍数为2。7.2测定条件7.2.1操作温度：以下所有操作应在 20℃～24℃下进行