NY_T 3286-2018荠菜对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3286-2018荠菜对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程Guideline for the detection of Capsella bursa-pastoris (L.) Medik. target-siteresistance to acetolactate synthase inhibiting herbicides2018-07-27 发布2018-12-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3286—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本标准由农业农村部提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：崔海兰、李香菊、于惠林、魏守辉、黄兆峰、李丹。I NY/T 3286—2018荠菜对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程1范围本标准规定了荠菜[Capsella bursa-pastoris（L.）Medik.］对乙酰乳酸合成酶（acetolactate synthase，ALS)抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程的检测程序、结果分析及注意事项。本规程适用于荠菜对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂产生靶标抗性的有关检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T1667农药登记管理术语NY/T1859.4农药抗性风险评估古第4部分：乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估3术语和定义NY/T1667、NY/T1859.4中界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3. 1靶标抗性target-site resistance由于除草剂作用靶标基因发生改变而导致的抗药性，包括靶标基因突变、靶标基因过量表达。3. 2非靶标抗性non target-site resistance杂草对除草剂的吸收、传导、代谢解毒能力的变化而导致的抗药性。3. 3整株生物测定法whole-plantbioassay通过整株杂草生物量对除草剂系列剂量梯度的反应，建立除草剂剂量与杂草生物量的关系，以杂草地上部生物量受除草剂的抑制程度来评价其对除草剂敏感性的方法。3. 4生长抑制中量herbicide rate required for50% growth reduction(GRso)使杂草生物量降低50%的除草剂剂量。3. 5抗性指数resistance index(RI)除草剂对杂草疑似抗药性种群与敏感种群的生长抑制中量的比值。3. 6靶标基因突变target-sitegenemutation由于靶标基因DNA分子中碱基对的取代，导致mRNA的某一密码子发生变化，从而引起编码的氨基酸变成另一种氨基酸，最终导致靶标酶多肽链中的氨基酸序列发生改变。4检测程序4.1种子采集 NY/T3286—2018当荠菜种子成熟时，在疑似发生抗药性的田块采集种子。采样田块应具有代表性，面积不小于667m²，成熟种子量不少于2000粒。及时晾干采集的种子，装人种子保存罐，置于阴凉干燥处保存。4.2材料培养选择无荠菜种子、无除草剂残留的农田地表土，混合20%～30%的草炭土，混合均匀后装入直径不小于10cm的培养钵；待测种群及敏感对照种子用0.05%~0.1%的赤霉素溶液浸泡12h～24h后冲洗干净，分别均匀撒播在土壤表面，覆土0.2cm～0.5cm，采用盆钵底部渗灌方式补充水分，置于15℃～25℃，光照时间8h～10h条件下培养。待荠菜长至2叶期，间苗，每盆保留长势一致的10个植株。4.3生物测定4.3.1单剂量甄别法待植株长至3叶期，用待测除草剂（ALS抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，除草剂剂量采用敏感种群的最低致死剂量，每个处理不少于4次重复，每个重复30株。用药21d后，调查存活株数，按式（1)计算株防效（%）。NLE=(1)X 100NT式中：一存活植株数占总处理植株数的百分比，单位为百分率（%）；ENL一一处理后存活植株数，单位为株；NT一处理植株总数，单位为株。4.3.2剂量反应曲线法经单剂量甄别法检测而明确有抗性的植株，进行繁殖，获得的种子用剂量反应曲线法进一步检测抗药性指数。待植株长至3叶期，用待测除草剂(ALS抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少设置5个剂量，每个剂量不少于4次重复，每个重复10株。以杂草鲜重或干重为指标，建立剂量反应方程，按式(2)计算生长抑制中量。D-C(2)Y = C+1+(X/GRso)式中:Y在除草剂处理下杂草地上部分鲜重或干重与对照鲜重或干重的百分比，单位为百分率（%）；c待测指标下限，单位为百分率（%）；D待测指标上限，单位