SNT 2497.4-2010进出口危险化学品安全试验方法 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.4—-2010进出口危险化学品安全试验方法第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验Test method of import and export dangerous chemicals--Part 4 : Saccharom yces cerevisiae mitotic recombination assay2010-03-02发布2010-09-16实施中华人民共和国发布星达,819105 直流国家质量监督检验检疫总局、数码防伪 SN/T 2497.4—2010前言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；-第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胭窝淋巴结试验；第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第 19 部分:Northern Blot 实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分:DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测调凋亡；-第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；111第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497的第4部分。本部分修改采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试指南NO.481《酿酒酵母有丝分裂重组试验》,其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按GB/T 1.1--2000 做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：熊中强、王利兵、彭梓、张园、赵琢、韩伟。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 2497.4--2010进出口危险化学品安全试验方法第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品进行酿酒酵母有丝分裂重组试验的试验原理、试验程序和试验结果。本部分适用于判定进出口危险化学品能否引起真核微生物酵母的有丝分裂重组。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2. 1有丝分裂交换mitotic crossing-over基因之间DNA片段的交换（通常在一个基因和其着丝粒之间）,导致交互的产物。2. 2mitotic gene conversion有丝分裂基因转换在一个基因内序列的信息单向转移,主要导致非交互产物。3原理3.1利用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)的某些菌株从杂合等位基因变为纯合等位基因时,菌株的一些表现性状及生长特性的改变来检测受试物是否引起了真核微生物酵母的有丝分裂重组。有丝分裂重组可以在酵母基因之间及同一基因内发生,前者称为交换，后者称为转换。3.2试验中有丝分裂的交换是通过杂合菌株中产生隐性纯合子的菌落或子菌落证实的；而有丝分裂转换是通过在同样的基因上携有两个不同的缺陷型等位基因的营养缺陷型杂合子菌株中产生原养型恢复体证实的。3.3利用二倍体酿酒酵母菌株 D4 在选择性培养基中生长的特性检测有丝分裂基因转换。ade2-2,ade2-1;trp5-12 和 trp5-27 是 ade2 和 trp5 位点上的异点等位基因。这些等位基因进行有丝分裂基因转换,产生携带一个野生型等位基因的原生型菌落，这些菌落能在缺乏色氨酸(trp)或腺嘌呤的选择性培养基上生长。3.4酵母菌株的有丝分裂交换可通过观察Ds或D，菌株菌落的颜色变化（产生红色或粉色的纯合子有丝分裂交换)或观察D，菌株产生放线菌酮抗性（cyhr2)在含放线菌酮的培养基上生长来检测。4试验程序4.1试验方法4.1.1最常用的菌株为二倍体 Ds、Dz、D4 和 JD1 菌株,所用的传代的培养菌株的自发有丝分裂重组频率应在可接受的正常范围内。4.1.2在试验的不同阶段选用适当的培养基（YEPD,SMM,SCM 及选择性培养基)培养试验菌株，以测定其存活率及有丝分裂重组频率。4.1.