SN_T 3064.8-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法 第8部分：黄色葡萄球菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3064.8-2011国境口岸蝇类、畵携带重要病原体检测方法‧第8部分：金黄色葡萄球菌Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port--Part 8 : Staphylococcus aureus2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码盼像 SN/T 3064.8--2011前言SN/T3064《国境口岸蝇类、蟹携带重要病原体检测方法》分为11部分：一第1部分：通用要求；-第2部分：沙门氏菌；-第3部分：志贺氏菌；-第4部分：致泻性大肠杆菌；第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌；第6部分：霍乱弧菌；第7部分：副溶血性弧菌;第8部分：金黄色葡萄球菌；第9部分：蜡样芽孢杆菌；第10部分：甲型肝炎病毒；-第11部分：寄生虫卵(包囊)。本部分为SN/T3064的第8部分。本部分按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：刘培、吴冬雪、曲鹏、高旗利、关淳、张霞、张海滨。 SN/T 3064.8—2011国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法　第8部分：金黄色葡萄球菌1范围SN/T3064的本部分规定了国境口岸输人性蝇类和蟹携带金黄色葡萄球菌的检测方法、结果判断、结果报告、阳性结果处置。本部分适用于检验检疫机构对输入性蝇类和携带金黄色葡萄球菌的检测和报告。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.10食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验ISO 6888-3 Microbiology of food and animal feeding stuffs-Horizontal method for the enumer-ation of coagulase-positive staphylococci(Staphylococcus aureus and other species)-Part 3: Detectionand MPN technique for low numbers3样本检测3.1培养基和试剂需要的培养基和试剂为改良 Giolitte 和 Cantoni（mGC)肉汤，琼脂溶液（20 g/L），Baird-Parker 培养基,兔血浆纤维蛋白原(RPF)培养基，脑心浸汤,兔血浆。具体成分及制备方法见 ISO 6888-3。除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化纯，水为蒸馏水。3.2检测程序金黄色葡萄球菌检测程序参见附录 A。3.3操作步骤3.3.1增菌培养分别取1mL样本处理液接种于含 10 mL mGC 的试管中，然后向培养基表面倾注一层 48℃士1℃保温的琼脂或石蜡，自然凝固形成熔封。36℃土1℃培养24h士2h，如果未出现黑色或黑色沉淀，继续培养至48 h士2 h。3.3.2分离培养用无菌勺切开出现黑色或黑色沉淀的改良GC管熔封。用接种环四区法划线转种BP平板和兔血浆纤维蛋白原平板,36℃±1℃培养24h士2h或48h士2h。 SN/T 3064.8—20113.3.3确证试验 BP 平板金黄色葡萄球菌在BP平板上的典型菌落呈现黑色或灰色、光滑、突起带透明带的菌落，透明带内形成乳色晕,24 h培养后直径1mm～1.5mm,48h后直径1.5mm～2.5mm。有的菌株不分解脂肪，除没有透明带和乳色晕外，其他相同。革兰氏染色金黄色葡萄球菌无芽孢，革兰氏染色阳性球菌，呈葡萄串状。凝固酶试验见 GB/T 4789. 10。兔血浆纤维蛋白原平板由于金黄色葡萄球菌具有凝固酶活性，1浆纤维蛋白原平板上形成黑色或灰色带有半透明晕圈的小菌落。培养初期可见到菌落形态同金黄色葡萄球菌的变形杆菌，但是培养24 h后，变形杆菌呈蔓延带有淡淡棕色的菌落。当平板上出现典型菌落时即为武验阳性4结果报告根据试验结果，报告该批样本中检文抹检出金黄色葡萄球菌。5 阳性结果处置判断为阳性结果的分离株应有资质的相主美实验确认，阳性结果确认后应及时上报主管部门。2 SN/T 3064.8--2011附录A(资料性附录)检测程序图标本15只～20只蝇或小棘或3只～5只大为一组，用0.5%吐温-80的生理盐水处理mGC36℃±1℃24 h±2 h或48 h±2 hBP兔血浆纤维蛋白原平板36 ℃±1 ℃24 h±2 h或48 h±2 h涂片染色血浆凝固酶试验36℃± 1℃ |24 h±2 h或48 h±2