SN_T 4877.9-2017基因条形码筛查方法 第9部分：检疫性腥黑粉菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4877.9—2017基因条形码筛查方法第9部分：检疫性腥黑粉菌DNA barcoding screening method-Part 9 :Quarantine Tilletia2017-08-29 发布2018-04-01实施中华人民共和国33发布国家质量监督检验检疫总局网电话406982155、刮涂层查真伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准基因条形码筛查方法第9部分：检疫性腥黑粉菌SN/T 4877.9-—2017*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.75字数 18 千字2018年5月第一版2018年5月第次印刷印数 1--500*书号：155066·2-32826 SN/T 4877.9—2017前言SN/T4877《基因条形码筛查方法》分为10个部分：第1部分：检疫性棒形杆菌；第2部分：检疫性黄单胞菌；第3部分：检疫性植原体；-第4部分：检疫性茎点霉；一一第5部分：检疫性拟茎点霉；-第6部分：检疫性嗜酸菌;第 7 部分:检疫性轮枝菌;第8部分：检疫性炭疽菌；第9部分：检疫性腥黑粉菌；第10部分：检疫性疫霉。本部分为SN/T4877的第9部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本部分主要起草人：程颖慧、章桂明、王颖、高瑞芳、汪莹、潘广、向才玉、冯建军、史亚千、王红英、谢晓露。1 SN/T 4877.9—2017基因条形码筛查方法第9部分：检疫性腥黑粉菌1范围SN/T 4877的本部分规定了小麦印度腥黑穗病菌 Tilletia indica 和小麦矮化腥黑穗病菌Tilletiacontroversa 的 DNA条形码筛查中序列的扩增、分析及结果判定等。本部分适用于小麦印度腥黑穗病菌和小麦矮化腥黑穗病菌的筛查。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法GB/T28080小麦印度腥黑穗病菌检疫鉴定方法3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1DNA条形码DNA barcode生物体内能够代表该物种的,标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段。3.2内部间隔转录区序列internal transcribed spacer;ITS在真核生物中,核糖体DNA是由核糖体基因及与之相邻的间隔区组成,其基因组序列从 5到 3依次为：外部转录间隔区、18S基因、内部转录间隔区1(ITS1）、5.8 S基因、内部转录间隔区2(ITS2)、28S基因和基因间隔序列。内转录间隔区是存在于 18S rDNA、5.8 S rDNA 和 28 SrDNA 之间的区域，ITS1和ITS2作为非编码区，受外界环境因素的影响较小，与编码区域相比具有进化速度快的特点，在种内的不同菌株之间高度保守，而在真菌种间存在极大的变化，表现出极大的序列多态性，能够提供详尽的系统学分析所需的可遗传性状。4检疫性腥黑粉菌的基本信息英文名：Quarantine Bunt学名：Tilletia indica中文名：小麦印度腥黑穗病菌学名:Tilletia controversa中文名：小麦矮化腥黑穗病菌分类学地位：真菌界（Fungi）、担子菌门（Basidiomycota）、黑粉菌纲（Ustomycetes）、黑粉菌目（Usti-laginales）、腥黑粉菌科（Tilletiaceae）、腥黑粉菌属（Tilletia）rma SN/T 4877.9—20175方法原理利用ITS片段作为检疫性病菌的条形码基因,通过对检测对象的 DNA 进行PCR扩增及产物测序后，利用生物条形码数据(BOLD)或中国检疫性有害生物DNA条形码数据库比对，根据序列相似度筛查物种。6仪器设备和试剂6.11仪器设备超净工作台、摇床、烘箱、高压灭菌锅、一20℃低温冰箱、PCR扩增仪、冷冻离心机、核酸蛋白分析仪、琼脂糖电泳仪、凝胶成像系统、纯水器。6.2 试剂氯仿、异戊醇、异丙醇、醋酸钠、甲酰胺、70%乙醇、无水乙醇、Tris饱和酚、Tag DNA聚合酶、明胶、溴化乙锭、DNA片段标记物、DNA裂解液、PCR缓冲液、电泳缓冲液、上样缓冲液、dNTPs（dATP、dG