SN_T 2870-2011中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for baculoviral midgut gland necrosis2011-05-31 发布2011-12-01实施中华人民共和布3国家质量监督检验检疫总局经马家 SN/T 2870—2011前言?本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：刘渤、陈莉莉、宗卉、罗卫、江育林。I SN/T 2870--2011中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范1范围本标准规定中肠腺坏死杆状病毒病（baculoviral midgut gland necrosis,BMN)的检测方法，是用临床症状作为初步诊断，压片和组织病理切片作为确诊的检疫方法。本标准适用于中肠腺坏死杆状病毒病的诊断和鉴定,适用于本病的流行病学调查、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。好是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所肴的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3设备、材料及试剂GB/T 6682要求。本标准所用试剂除特殊规定外均为分析纯试验用水应符合3. 1石蜡组织切片机。3.2组织脱水机(使用手工脱水的缸)3.3石蜡包埋机。3. 4切片染色机（使用手工染包所需的缸）。3.5展片所用水浴锅。3.6烘片机。3.7正置显微镜。、33.8载玻片、盖玻片等常规组织切片用具3.9Davidsons 固定液（见173.10石蜡（熔点52℃～54℃岁50.℃52℃）韧片级南V.3.11乙醇：包括无水乙醇、95%醇、85%乙醇、80%乙醇、75%乙醇、50%乙醇。3. 12二甲苯。3.13盐酸。3.14氢氧化钠。3. 15苏木素染色液（见A.2)。3. 16伊红染色液（见A.3）。3.17黏片剂（见A.4）。4诊断方法4.1BMNV 的初步诊断方法对于监测和检测BMNV,最好取幼体和早期的仔虾。临床症状：幼体和仔虾患病后，首先可以看到白浊的中肠腺。随着疾病的发展，白浊化越来越明显， SN/T 2870—2011越来越容易辨认。参见图 B.14.2BMNV 的确诊方法4.2.1压片法用新鲜对虾的中肠腺压片或涂片染色后在暗视野下检查能快速诊断BMN病毒感染。将组织置于载玻片上，用解剖刀将样品切碎，盖上盖玻片，在暗视野下观察。4. 2.2组织病理学技术组织固定.1用Davidsons AFA固定液固定欲检查的虾，准备足够的固定液，固定液体积应是欲固定的组织块总体积的 10 倍～15 倍。推荐用 Davidsons AFA 固定液，该固定液可迅速固定并减轻对虾的自溶变化，而且其中含的酸性成分可以除去表皮的石灰质。.2对虾幼体或仔虾，用细网筛或者吸管把所选的幼体或仔虾直接放人固定液。固定12 h～24 h，然后转人50%～70%的乙醇中保存。.3稍大的仔虾和很小的稚虾：用针或尖头镊子切去体表虾壳，把虾直接浸泡在固定液中，固定12 h～24 h,然后转人50%～70%的乙醇中保存。.4更大的仔虾、稚虾和成虾，用注射器往虾头处注人固定液（用量为样品体积的5%～10%。针头大小根据虾的大小决定，例如对仔虾和小稚虾可用27号针头）。首先注射中肠腺，要注射2个或多个位点，注射的量要足以使中肠腺变白或橘黄色；然后取出中肠腺浸泡在固定液中，固定12 h～24 h,然后转人50%～70%的乙醇中保存。组织学标本的修整取材.1从50%或70%的乙醇保存液中取出固定好的标本，置于木头或塑料垫板上，根据标本的大小进行修整，确保目标组织能被有效切片。.2幼体和仔虾：用擦镜纸将个体包好，放于脱水盒中进行脱水，包理时去除擦镜纸，用热镊子调整标本在包埋器血中的位置进行包埋。.3小于3cm的幼虾：用单面刀片或解剖刀沿幼虾的中线右侧将标本纵剖两半。取包含中线的左侧进行脱水，包埋时纵切面向下包埋。.4大于3cm的幼虾或亚成年虾：用单面刀片或解剖刀从对虾的头胸和腹节连接处切断，再将头胸沿中线右侧纵剖两半。取包含中线的左侧，切去步足80%的长度，剔除胃内容物；如果头胸长度大于1cm,切取包含胃部和肝胰腺部分的1cm以下的部分；如果厚度大于0.5cm,削去高出0.5cm的部分，再从不含中线的右侧头胸部斜切下鳃区，将切取的含中线左侧头胸部和切下的鳃区放人同一个脱水盒中进行脱水，包埋时将含中线左侧头胸部的纵切面向下，鳃区的纵切面向上，前后对错放人同个包埋器皿中包埋。.5大于8cm的虾，参照大于3cm 的虾进行修整，按照长宽不超过 1 cm×1 cm、厚度不超