SN_T 3589.3-2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法 第3部分：鲑鱼成分检测 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3589.3—2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第3部分：鲑鱼成分检测实时荧光 PCR 法Identification of fish species in export food-Part 3 : Detection of salmonidae ingredient-Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3589.3—2013前言SN/T3589《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法》共分为7部分：—第1部分：石斑鱼成分检测　实时荧光PCR法；-第2部分：安康鱼成分检测　实时荧光PCR法;-第3部分：鲑鱼成分检测实时荧光PCR法；第4部分：河豚鱼成分检测实时荧光PCR法；-第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法；-第6部分：金枪鱼成分检测实时荧光PCR法；第7部分：鳕鱼成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3589的第3部分。本部分按照GB/T1.12009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李想、陈颖、吴亚君、高宏伟、陈文炳、陈双雅、韩建勋、黄文胜、郑秋月、曹琛福。1 SN/T 3589.3—2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第3部分：鲑鱼成分检测实时荧光PCR法1范围SN/T3589的本部分规定了出口食品中鲑科（Salmonidae）鱼类（鲑鱼）的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品中鲑鱼三个亚科七个属［包括鲑亚科（Salmoninae）的大麻哈鱼属（Oncorhynchus）、红点鲑属（Salvelinus）、哲罗鲑属（Hucho）、细鳞鲑属（Brachymystaa）和鲑属（Salmo），白鲑亚科（Coregoninae）的白鲑属（Coregonus）和茴鱼亚科（Thymallidae）的茴鱼属（Thymallus）鲑鱼及其制品鉴伪的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403　实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1鲑鱼 Salmonidae鲑鱼指鲑科(Salmonidae)鱼类,隶属鲑形目鲑亚目，冷水洄游性鱼类。鲑科包括三个亚科七个属。三个亚科为鲑亚科（Salmoninae）、白鲑亚科（Coregoninae）和茴鱼亚科（Thymallidae），其中鲑亚科包括5个属，为大麻哈鱼属（Oncorhynchus）、红点鲑属（Salvelinus）、哲罗鲑属（Hucho）、细鳞鲑属（Brachymysta）和鲑属（Salmo），白鲑亚科只有白鲑属（Coregonus），茴鱼亚科只有茴鱼属（Thymallus)。3.2实时荧光 PCR real-time PCR在PCR扩增时加人带有荧光基团的特异性探针（Taqman探针）或荧光染料，使PCR产物的累积与荧光信号的累积完全同步，实现PCR产物的实时监测。3.3Ct 值 cycle threshold value每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。 SN/T 3589.3—20134 缩略语下列缩略语适用于本文件。CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide)NTC:空白对照(No Template Control)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Taq:水生热栖菌(Thermus aquaticu)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷[tris（hydroxymethyl）aminomethane]TE:Tris-HCl、EDTA 缓冲液ROX:羧基-X-罗丹明(carboxy-X-rhodamine)UNG酶:尿嘧啶DNA-糖基化酶（uracil-N-glycosylase)dNTPs: 含 dATP.dTTP(dUTP).dCTP.dGTPGH:生长激素基因(growth hormone gene）５　方法提要提取样品DNA，以DNA为模板，分别采用鲢鱼GH基因的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的