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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3868—2014出口植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的检测免疫亲和柱净化高效液相色谱法Determination of aflatoxin B, , B2 ,G, ,G2 in edible oil for export-Immunoaffinity column clean-up and HPLC with fluorescence detection2014-08-01 实施2014-01-13 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局
SN/T 3868—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国山东出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:鲍蕾、许艳丽、吴振兴、静平、吕宁、金莹。I
SN/T 3868-2014出口植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的检测免疫亲和柱净化高效液相色谱法1范围本标准规定了出口植物油中黄曲霉毒素 BI、B²、G1、G2 的检测方法。本标准适用于花生油、橄榄油,芝麻油虫黄曲霉毒素的检测。2规范性引用文件生下列文件对于本文件的应用是必不可少的。是注自期的用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样中的黄曲霉毒素用甲醇-永(5545,体积比)提取,提取液经离心、过滤、稀释后,用免疫亲和柱净化,采用液相色谱结合荧光检测器柱后衍生法测定黄曲霉毒素的含量,外标法定量。4 试剂和材料为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。除特殊规定外,所用化学试剂直4.1甲醇:HPLC级。4.2 乙腈:HPLC级。4.3不硝酸:65%。4.4氯化钠。4.5溴化钾。4.6提取液:甲醇-水(55→45,体积比)。淋洗液:甲醇-水(10十90,体积比)。4.74.8黄曲霉毒素标准品:A 6636(黄曲霉毒素 Bi)、A 9887(黄曲霉毒素 B²)、A 0138(黄曲霉毒素 G)、A 0263(黄曲霉毒素G²),Sigma Aldrich,或相当者;纯度≥99.0%。4.9黄曲霉毒素标准储备液:将 1 mg 黄曲霉毒素标准品 Bl、B²、Gl和 G²(4.8)分别溶解于乙腈(4.2),并定容至 10 mL,得100 μg/mL的标准储备液 I,准确移取四种黄曲霉毒素标准储备液 I各 1 mL,分别溶解于乙腈(4.2)并定容至 10 mL,得 10 ug/mL黄曲霉毒素 B、B²、G1、G²的标准储备液 IⅡI,保存于18℃。4.10黄曲霉毒素混合标准中间液:准确移取适量四种10 μg/mL 黄曲霉毒素标准储备液Ⅱ,放置在同一容量瓶中,以乙腈(4.2)稀释至刻度线,作为标准混合中间液,含有黄曲霉毒素总量 400 ng/mL(包含黄曲霉毒素 Bl、B²、G1、G²分别为200,50,100 和 50 ng/mL),保存于一18℃。黄曲霉毒素标准工作液:移取适量的不同体积的黄曲霉毒素混合标准中间液(4.10),以50%甲4.11醇-水溶液按表1配制浓度梯度的标准曲线,即用即配。1
SN/T1黄曲霉毒素标准工作液配制AFB /AFB2 /AFG: /AFG2 /AF总量/浓度梯度(ng/mL)(ng/mL)(ng/mL)(ng/mL)(ng/mL)STD10.50.1250.25→0.1251STD5?2.5STD30.6251.2550.625STD4510STD5102.552.520STD6 000004.12离心管:50 mL。4.13定性滤纸。4.14 玻璃微纤维滤纸。4.15黄曲霉毒素免疫亲和柱:VICAM Aflatest WB柱(G1024;Vicam,Watertown,MA),或相当者。4.1610 mL前处理玻璃针筒。5仪器与设备5.17高效液相色谱仪:配荧光检测器,或相当者。5.2柱后衍生装置:可使用Kobra Cell 电化学衍生装置、UVE光化学衍生装置或者相当者。5.3离心机:7 000 r/min。5.4振荡器。6 操作方法6.1提取准确称取5.0g样品,置于50mL离心管中,加人1.0g氯化钠。加人25mL提取液(4.6)。旋涡振荡,让样品与提取液充分混合;以400r/min振荡10min,以7000r/min离心10min;取下层澄清提取液,定性滤纸过滤;用量筒量取15mL滤液,置于50mL量筒中,加人30mL水,混勾后,以微纤维滤纸过滤。6.2免疫亲和柱净化将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下,准确移取30.0mL(相当于2.0g试样)上述澄清滤液过免疫亲和柱,以每秒钟一至两滴的流速全部通过亲和柱;
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