SNT 1692.3-2006非洲马瘟补体结合试验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1692.3—2006非洲马瘟补体结合试验操作规程Protocol of complement fixation test for african horse sickness2006-04-25 发布2006-11-15 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局21经淘工数码防伤 SN/T 1692.3—2006前言SN/T1692共分为三个部分：非洲马瘟琼脂免疫扩散试验操作规程；非洲马瘟血球凝集和血球凝集抑制试验操作规程；非洲马瘟补体结合试验操作规程。本部分为SN/T1692的第3部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本部分主要起草人：董俊、周晓黎、花群义、肖荣海、杨云庆、应雪松。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1692.3—2006非洲马瘟补体结合试验操作规程1范围SN/T1692的本部分规定了非洲马瘟补体结合试验的操作规程。本部分适用于非洲马瘟的检验检疫。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T1692的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂和材料本部分所用水应符合GB/T6682中三级水的规格。所用试剂除特殊规定外，均指分析纯试剂。3.1非洲马瘟补反抗原：由指定单位提供或按附录A制备。3.2补体：由指定单位提供或按附录A制备。3.3溶血素：由指定单位提供。3.4阳性血清：由指定单位提供，使用前1：2稀释,58℃～59℃水浴30min灭能。3.5阴性血清：由指定单位提供,使用前1：10稀释,58℃～59℃水浴30min灭能。3.6阿氏液:按附录 A配制。3.7巴比妥缓冲液(VBS):按附录 A配制。4器械和设备4.1将各型滴头1.034×105Pa高压15min,烘干备用。4.2冷冻高速离心机。4.3水浴锅。4.4微量移液器。5样品处理将待检动物编号登记后，无菌采血，5000 r/min 10℃离心10min～15 min，无菌分离血清 2份一70℃保存（一份正式试验用，一份备用），使用前用巴比妥缓冲液作1：10稀释，马血清56℃、斑马血清60℃、驴血清62℃水浴30min灭活。6预备试验6.12%绵羊红细胞悬液制备6.1.1取盛有阿氏液100mL的灭菌烧瓶一个，从公绵羊颈静脉无菌采血50mL，混合后置 4℃冰箱稳定 4 d~5 d。6.1.2使用时将血液吸人离心管中，1500r/min离心15min，用吸管吸去上清和红细胞上层的白细胞和血小板薄膜后加BBS缓冲液洗涤，再经1500r/min离心15min，弃去上清，如此反复洗四次。6. 1.3 将最后一次洗过的红细胞泥用 VBS 缓冲液按 2%稀释即成(2 mL 细胞+98 mL VBS 配制成2%悬液)。1 SN/T 1692.3—20066.2.配制标准溶血管（见表1)%VBS溶血液制备：取7.85mL纯水加人 0.15 mL沉淀红细胞，混勾，使红细胞完全溶血后，再加人5×VBS原液2 mL。%红细胞悬液制备：取沉淀红细胞0.15mL，加人9.85mLVBS缓冲液工作液，混匀。表 1 标准溶血管配制表单位为毫升溶血度/(%)成分100 708090020.-.30...40..5060100.3750.3750.3750.3750.3750.3750.375BBS 缓冲液0.3750.3750.3750.3750.2250.2500.2001. 5% BBS 溶血液0.0500.0750.1000.1250.1500.1750.0000.0250.0750.0250.0000.2500.2250.200 -10.1750.15019.1250.1000.0501.5%红细胞悬液6.3溶血素效价测定每批溶血素用前必须进行效价测定，并标明效价，30 d内继续使用时，可不再测定。.2稀释：先将溶血素作1：100稀释，即0°2 mL(其中含甘油 50%)溶血素加人9.8mL VBS缓冲液,然后按表 2 配制不同稀释度溶血素表 2 溶血素稀释表单位为毫升稀释度成分1 : 2 500 *T7 3 0003500+74 0001 : 4 5001 : 5 0001 : 2 0000.10. 1↓0.10. 10. 10. 1 0.11：100×溶血索4. 44.9BBS1. 9|2. 42. 93. 按表3建立试验，先将溶血素与红细胞混匀，再加人其他