SN_T 3132-2012出口牛乳制品中牛免疫球蛋白G的测定 酶联免疫吸附法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3132—2012出口牛乳制品中牛免疫球蛋白G的测定酶联免疫吸附法Detection of bovine immunoglobulin G in milk products of export-Enzyme-linked immunosorbent assay method2012-11-16 实施2012-05-07发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3132—2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、北京望尔生物技术有限公司。本标准主要起草人：石建平、高东微、孟日增、马孝斌、刘津、万宇平、何方洋、陈源树。I SN/T 3132-2012出口牛乳制品中牛免疫球蛋白G的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了牛乳制品中牛免疫球蛋白G含量的酶联免疫吸附试验检测方法。本标准适用于牛初乳产品和添加了牛初乳成分的牛乳制品中的牛免疫球蛋白G含量的测定。本标准的测定低限为 9.8 mg/g2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引哺文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理采用间接竟争酶联免疫吸附方法，在微孔条上包被牛免疫球蛋白G抗原，试样中牛免疫球蛋白G与酶标板上的包被抗原竞争抗牛免疫球蛋白G抗体，加酶标记抗抗体后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪在450nm处测定吸光度。吸光值与牛免疫球蛋白G含量成负相关，与标准曲线比较即可得出牛免疫球蛋白G含量。4试剂和材料4.1所用试剂除特别注明外均为分析纯试剂，永为符合/GB/T_6682规定的一级水。4.2牛免疫球蛋白G酶联免疫吸附检测试剂盒:2℃~8℃保存。见附录 A。4.35%氯化钠溶液。5仪器和设备5.1酶标仪：配备 450 nm滤光片。5.2 旋涡振荡器。5.3可调移液器:单道 20 μL,50 μL,100 μL,1 000 μL;多道 250 μl。5.4天平：感量0.001 g。6试样的制备和保存称取待测样品0.02g溶于20mL5%氯化钠溶液中（终浓度为1mg/mL），用旋涡振荡器旋转振6. 11）望尔”牛免疫球蛋白G酶联免疫吸附试剂盒是适含的市售产品的实例。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，可经实验评估后使用这些等效产品。 SN/T 3132-—2012荡2min，制备成试样储备液，6.2配制好的试样储备液，按照1：19（体积比）用稀释液进行稀释（20uL试样溶液十380μL稀释液），用旋涡振荡器旋转振荡2min，得到试样溶液。试样溶液取 40μL用于测定。试样溶液稀释倍数为20倍。7洗涤工作液的配制用水将20倍的浓缩洗涤液按1：19（体积比）进行稀释，用于酶标板的洗涤。2℃～8℃保存。8测定8.1使用前将全部试剂在室温下放置1 h～2 h。8.2按每个标准溶液和试样溶液至少两个平行计算，将所需数目的酶标板条插人板架中。8.3测定前用洗涤工作液洗涤一次酶标板条，每孔250uL，洗涤时应用洗涤工作液浸泡酶标板孔2 min,将孔内液体甩干,再用吸水纸拍干。8.4每孔加标准溶液或试样溶液40μL后，再加抗牛免疫球蛋白G抗体工作液60uL，轻轻振荡混匀。用盖板膜盖板，置37℃下反应10min。8.5每孔加酶标记抗抗体50μl，轻轻振荡后，用盖板膜盖板后置37℃下反应30min。8.6小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL充分洗涤 4次～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干。8.7每孔加底物液A液和B液各50μL，轻轻振荡混匀于37℃下避光显色15min。8.8每孔加终止液50uL，轻轻振荡混匀，置酶标仪于450nm波长处测量吸光度值。9结果计算9.1计算相对吸光度值用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值的比值进行计算。见式(1)：B相对吸光度值=X 100%(1)B。式中:B ——标准(试样)溶液的吸光度值;B。一———空白(浓度为 0的标准溶液)的吸光度值。9.2绘制标准曲线以标准溶液牛免疫球蛋白G的浓度（mg/I)的对数值(log)为横坐标，以相对吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的绘制可使用数据分析软件，绘制的标准曲线参见附录B。每次测定应重新绘制标准曲线。9.3计算样品中牛免疫球蛋白G含童利用标准曲线求得试样溶液相对吸光度值所对应的牛免疫球蛋白G的浓度，并计算样品中牛免疫球蛋