SN_T 2744-2010鸭病毒性肠炎检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2744—2010鸭病毒性肠炎检疫技术规范Quarantineprotocolforduckvirusenteritis2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T2744—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)发布的《陆生劫物诊断试验和疫苗手册》（2009版)中2.3.7章关于鸭病毒性肠炎的有关内容而制定：修改采用了OIE发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中病毒分离鉴定、PCR方法、微量血清中和试验的技术要求；-增加了OIE发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中没有提及的荧光PCR检测方法、直接荧光抗体试验、间接酶联免疫吸附试验。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准的起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孟日增、石建平、王建华、肖成蕊、王伟利、王振国、刘晶。 SN/T2744—2010鸭病毒性肠炎检疫技术规范范围本标准规定了鸭病毒性肠炎的病毒分离与鉴定、PCR方法、荧光定量PCR方法、免疫荧光试验、微量中和试验、ELISA等操作规程及技术要求。本标准适用于鸭、鹅等水禽及天鹅（雁形目)鸭病毒性肠炎的诊断与检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。风是注日期的叫用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格试验方法3概述鸭病毒性肠炎（duckvirus entlritis）义称鸭瘟（duckplgie),该病是由疱疹病毒科鸭瘟病毒引起的种急性(有时呈慢性)鸭、鹅和天鹅（雁形目)接触性传染病其特征为体温升高，两腿麻痹，下，流泪和部分病鸭头颈肿大。食道粘膜有小出点，并有灰黄色假膜双盖或溃疡，泄殖腔粘膜充血出血水肿和假膜覆盖。肝有不规则大小不等的血点知坏死。本病传播迅速发病率和病死率都很高，严重地威胁养鸭业的发展。鸭病毒性肠炎的诊断方法包括临床综合诊断、病原学诊断、清学试验和分子生物学检测。4诊断技术4.1临床综合诊断4.1.1临床症状自然感染的潜伏期一般为3d～4d，鸭群突然出现持续性高死亡率，病初体温升高（43℃以上），呈稽留热。这时病鸭表现精神萎顿，头颈缩起，食欲减少或停食，渴欲增加，羽毛松乱无光泽，两翅下垂，两脚麻痹无力、走动困难，流泪和眼脸水肿是鸭瘟的一个特征性症状。同时病鸭下痫，排出绿色或灰白色稀粪，泄殖腔粘膜充血，出血水肿严重者粘膜外翻。用手翻卉肛门时，可见到泄殖腔粘膜有黄绿色的假膜，不易剥离。成年鸭死亡时骠情良好，死亡的鸭阴茎脱垂明显；产蛋鸭群在死亡高峰期产蛋明显下降；2周龄～7周龄商品维鸭表现脱水、消瘦，喙发蓝，结膜炎、流泪、鼻腔有渗出物和泄殖腔有血染等特点。自然条件下鹅感染鸭瘟，其临床特点与鸭相似。4.1.2病理学检查鸭瘟眼观变化见败血症的病变，体表皮肤有许多散在出血斑，眼脸常粘连分泌干酪样物覆盖。部分头颈肿胀的病例，皮下组织有黄色胶样浸润。食道粘膜有纵行排列的灰黄色假膜覆盖或小出血斑点，假膜易剥离，剥离后食道粘膜留有溃疡斑痕，这种病变具有特征性。肠粘膜充血出血，以十二指肠和直肠 SN/T2744—2010最为严重。泄殖腔粘膜表面覆盖有一层灰褐色或绿色的坏死结痴，不易剥离，粘膜上有出血点和水肿。产蛋母鸭的卵巢滤泡增大，有出血点和出血斑，有时卵泡破裂，引起腹膜炎。维鸭感染鸭瘟病毒时，法氏囊呈深红色，表面有针尖状的坏死灶，囊腔充满白色的凝固性渗出物，这些病变具有诊断意义。组织学变化，以血管壁损伤为主，小静脉和微血管明显受损，管壁内皮破裂。具有特征性组织学变化，见坏死的肝细胞发生明显肿胀和脂肪变性，肝索结构破坏，中央静脉红细胞崩解，血管周围有凝固性坏死。肝细胞见有核内包涵体。脾窦充满红细胞，血管周围有凝固性坏死。食道和泄殖腔粘膜上皮细胞坏死脱落，粘膜下层疏松，水肿，有淋巴样细胞浸润。胃肠粘膜上皮见有核内包涵体。结合临床症状与病理学检查，可对本病作出初步诊断。4.2病毒分离与鉴定4.2.1材料和试剂4.2.1.1器材细胞培养瓶（或培养板）、吸管、移液器、二氧化碳培养箱、冷冻高速离心机、研磨器、倒置显微镜、G6玻璃滤器、孔径0.22μm微孔滤膜。4.2.1.2水符合GB/T6682中一级水要求。4.2.1.3·试剂胰酶消化液、细胞生长液、细胞维持液、双抗液分别见附录A.1、A.2、A.3、A.4。4.2.1.4实验动物1日龄易感雏鸭、10日龄14日龄SPF鸭胚。4.2.1.5细胞原代鸭胚成纤维细胞（DEF细胞）、原代鸭胚肾细胞（DEK)。4.2.2病毒分离培养4.2.