SN 1197-2003油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1197—2003油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of the polymerase chain reaction for detecting geneticallymodified components in rapeseeds2003-03-17发布2003-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局10 SN/T 1197—200311前言:本标准的附录 A是资料性附录。-1本标由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：潘良文、沈禹飞、陈家华、胡永强。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。11一--→: SN/T 1197--2003油菜籽中转基因成分定性 PCR检测方法11范围1本标准规定了抗草甘麟除草剂、抗草丁麟除草剂、雄性不育转基因油菜籽的定性PCR检测方法。本标准适用于抗草甘麟除草剂、抗草丁麟除草剂、雄性不育转基因油菜籽的定性 PCR检测。2 规范性引用文件1下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然后，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T 1193基因检测实验室技术要求SN/T1194植物及其产品中转基因成分检测抽样和制样方法1SN/T1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法3术语、定义和缩略语!下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3. 1转基因 transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导人手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3.2聚合酶链式反应 polymerase chain reaction,PCR模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板 DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸,然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使被扩增的基因片段以几何倍数扩增。3.3缩略语一3. 3. 1 PCR:polymerase chain Ieaction,简称 PCR。13.3.2 DNA;deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。3.3.3dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷酸三磷酸3.3.4 dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。3.3.5 dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。13.3.6 dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。3.3.7 dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。3.3.8 dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。二： SN/T 1197--20033. 3. 9 UDG:uracil DNA glycosylase,尿嘧啶 DNA-糖基酶。3. 3. 10 bp: base pair,碱基对。3. 3. 11 EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3. 3. 12 Taq: Tag DNA Polymerase,耐热 DNA 聚合酶。3.3. 13 TE:Tris-HCl、EDTA 缓冲液。3.3.14 SDS:sodium dodecylsulfate,十二烷基磺酸钠。3.3. 15 Tris:tris （hydroxymethyl) aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。3.3.16PEP：phosphoenolpyruvate carboxylase gene,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。3. 3. 17 FMV 35S:35S promoter from a modified figwort mosaic virus(caulimovirus group),玄参花叶病毒35S启动子。3. 3. 18CP4 EPSPS:5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene，5-葬草酸-3-磷酸合成酶基因。3.3. 19 CTP:chloroplast transit peptide gene,叶绿体运输肽基因。3.3.2