GH_T 1114-2015蜂胶中阿替匹林C的测定方法 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.140GHB 47备案号：51234—2015中华人民共和国供销合作行业标准GH/T 1114—2015蜂胶中阿替匹林C的测定方法高效液相色谱法Method for the determination of artepillin C in propolis-High-performance liquid chromatography2015-08-21发布2015-10-01实施中华全国供销合作总社发布 GH/T 1114--2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由浙江大学提出。本标准由中华全国供销合作总社归口。本标准起草单位：浙江大学、蜂乃宝本铺（南京）保健食品有限公司。本标准主要起草人：胡福良、张翠平、刘嘉。I GH/T 1114---2015引言本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，涉及本文件相关的专利（ZL201310075055.4）的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得：专利持有人：浙江大学。地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号。请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 GH/T 1114—2015蜂胶中阿替匹林C的测定方法高效液相色谱法1范围本标准规定了高效液相色谱法测定蜂胶中阿替匹林C的方法。本标准适用于蜂胶中阿替匹林C的定性和定量测定。本标准的检出限为0.024mg/g，定量限为0.080mg/g。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1酒神菊属型蜂胶Baccharis-type propolis巴西绿蜂胶（俗称）以酒神菊属（Baccharis)为主要植物来源的蜂胶。3.2杨属型蜂胶poplar-type propolis以杨属（Populus）为主要植物来源的蜂胶。3.3阿替匹林 C artepillin C3，5-二异戊烯基-4-羟基肉桂酸，分子结构式见图1。相对分子质量为300.40，是一种2，4，6-三取代苯酚类物质。阿替匹林 C存在于 Baccharis、Relhania 和 Flourensia heterolepis 等植物中，特别是在巴西东南部的 Baccharis dracunculifolia DC.中大量存在,被认为是巴西绿蜂胶的特征性成分。HO°图 1 artepillin C 的分子结构1 GH/T 1114--20154原理试样经85%乙醇超声提取、离心、过滤、定容，用0.45μm有机系滤膜过滤后得澄清液，用反相高效和定量。5试剂与材料除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定要求。5.1 甲醇:色谱纯。5.2无水乙醇：分析纯。5.3乙酸分析纯。5.41%乙酸溶液（体积分数）：量取10mL乙酸（5.3)倒人加有900mL水的容量瓶中，用水定容于1000mL：经0.45 μm 滤膜过滤。5.5阿替匹林C标准品：纯度≥98%，CAS:72944-19-5。5.6阿替匹林C标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取阿替匹林C标准品（5.5)10.0mg于10mL棕色5.7阿替匹林C标准工作液：吸取适量1.0mg/mL的标准储备液（5.6），用甲醇溶液（5.1)分别稀释成0.05 mg/mL、0.1 mg/mL0.2 mg/mL、0.3 mg/mL,0.4 mg/mL、0.5 mg/mL六个浓度的标准工作液，现用现配。5.8滤膜：0.45μm有机系滤膜。6仪器与设备6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2粉碎机。6.3超声波清洗器。6.4 离心机。6.5　分析天平：精确至0.0001g。7试样制备与保存从待测蜂胶样品中取出约50g，密封，并做标记，于一18℃冷冻保存。取出冷冻贮存的试样20g～30g，迅速用粉碎机粉碎，过40目筛。8操作步骤8.1试样溶液的制备准确称取0.25g蜂胶试样，精确到0.01g，用5mL85%乙醇超声提取15min（25kHz，功率为50W），然后在离心机上以4000r/min的转速离心15min，取上清液置于50mL容量瓶中，重复提取离心3次，合并上清液，用85%乙醇定容至50mL，经0.45μm滤膜（5.8）过滤，滤液用于液相色谱测定。2 GH/T 1114—20158.2色谱参