DB37T 604-2006鸡肝中金霉素残留量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.30B40DB37备案号山長东省地電方标准DB37/T604—2006鸡肝中金霉素残留量的测定高效液相色谱法Determination of chlortetracycline residue in chicken liverhigh performance liquid chromatography200×-××-××发布2006-07-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T604—2006前言本标准由山东省备牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出，本标准起草单位：山东省畜产品质量检测中心。本标准主要起草人：高迎春、陈玲、冯修光、魏秀丽 DB37/T604—2006鸡肝中金霉素残留量的测定一高效液相色谱法1范围本标准规定了鸡肝中金霉素残留量的高效液相色谱测定法，本标准适用于鸡肝中金霉素残留量的测定。本方法的检出限为50ug/Kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的多改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理鸡肝组织经磷酸氢二钠-柠橡酸-乙二胺四乙酸二钠缓冲液(PH4.0)提取，过滤后，通过C萃取柱水洗后，用草酸甲醇液洗脱，洗脱液用HPLC分离，紫外检测器在360nm处测定。4试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水符合GB/T6682一级水的规定。4.1金毒系标准品：含金毒系不少于90.0%。4.2乙腈（CH,CN）：色谱纯。4.3甲醇（CH/OH）：色谱纯。4. 4正已烷（CsHa）。4. 5三氯甲烷（HCC1s），4. 6草酸（C:H-0.+2H:0）4.7磷酸氢二钠（NaHPO,）4.8柠檬酸(C,H,0)4.9乙二胺四乙酸二钠(Na-EDTA)。4.10提取液：称取磷酸氢二钠（4.7）28.4g，用水溶解并定容于1000mL量瓶中。称取柠橡酸（4.8）21g用水溶解并定容于1000mL量瓶中，量取柠檬酸溶液1000mL，加磷酸氢二钠溶液625mL，加60.5g乙二胺四乙酸二钠（4.9），混匀备用。4.11草酸落液c【（C,H,0,）】=0.01moL/L：称取草酸（4.6）1.26g，用水落解并定容于1000mlL量瓶中，4.12草酸甲醇溶液c【（CH0）】=0.01moL/L：称取草酸（4.6）1.26g，用甲醇（4.3）溶解并定容于1000mL量瓶中。4.13金毒素标准储备液：称取金霉素标准品（4.1）100mg（准确至1mg），用甲醇（4.3）溶解并定容至100mL棕色量瓶中。其浓度为1mg/mL.4.14金毒系标准中间波：精密量取1mg/mL金毒素标准储备液（4.13）1.00mL，用甲醇（4.3）稀释并定容于100mL棕色容量瓶中，其浓度为10g／mL.4.15金毒系标准工作液：精密吸取标准中间液（4.14）50μL、100μL、250μL、500μL、1500μL于10mlL棕色容量瓶中，加6.0ml草酸甲醇溶液（4.12），并用水稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为0.05Hg/ml、0.1Hg / mL、0.25μg /ml、0.5μg / mlL、1. 0μg / mlL和1. 5Ag / mL 的系列标准工作液。5仪器1 DB37/T604—20065.1高效液相色谱仪：具紫外检测器。5.2天平：感量0.01g5.3分析天平：感量0.0001。5.4匀浆机（10000r/min）5.5离心机（4000r/min）。5.6C萃取柱，5.7针头过滤器：孔径为0.45m有机系滤膜。5. 8离心管：50ml.5. 9微量移液器：单道1μlL~1000μl。6分析步骤6.1C萃取柱前处理取Cs柱，依次使用2ml甲醇（4.3）和2ml水润洗后备用。6.2提取称取5g土0.05g供试试样，置50mL离心管（5.8）中，加提取液（4.10）15.0mL，三减甲烧（4.5）5mL，正已烷（4.4）5mL，匀勾浆30S，离心10min，分离后的残渣用10ml提取液（4.10）处理，振荡5min，离心5min，合并两次提取液，离心5min，取10mL上清液过C萃取柱（6.1），用水洗至中性。再先后以草酸甲醇溶液（4.12）0.60mL，水0.40mL洗脱。洗脱液经0.45μm激孔滤膜过滤，滤液待测.同时做试剂空白。6.3测定6.3.1高效液相色谱参考条件色谱柱：Cs柱，250mm×4.6mm，粒径5μm。流动相：乙（4.2）+甲醇（4.3）+草酸溶液（4.11）=12+20+68。流速：1.0mL/min检测器：紫外检测器，检测波长：360nm