NY_T 3854-2021CN看麦娘对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程.pdf

ICS 65.100CCS B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T3854—2021看麦娘对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程Technical code of practice for detection the targetsite resistance of Alopecurusaequalis Sobol. to acetylcoenzyme A carboxylase inhibiting herbicides2021-05-07发布2021-11-01实施：中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3854—2021前本文件按照GB/T 1. 12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口，本文件起草单位：中国农业科学院植物保护研究所。本文件主要起章人案海兰，李香菊、陈景超、李政、彭立存、郭小桐 NY/T 3854—2021看麦娘对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂乾靶标抗性检测技术规程范围本文件规定了看麦娘（AlopecurusaequalisSobol.）对乙酰辅酶A废化酶（acetyl-coenzymeAcarboxylaseACCase)抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程的基本要求及注意事项。本文件适用于看麦娘对乙酰辅醇A羧化酶抑制剂类除草剂产生靶标抗性的有关检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T1667—2008农药登记管理术语NY/T1859.7—2014农药抗性风险评估第7部分：抑制乙酰辅酶A羧化酶除草剂抗性风险评估NY/T 3287—2018日本看麦娘对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程3术语和定义NY/T1667—2008、NY/T1859.7—2014NY/T3287—2018界定的术语和定义适用于本文件。4检测程序4.1材料培养选择无看麦娘种子、无除草刻残留的农田地表土，混合20%～30%的草炭土，混合均匀后装入直径不小于10cm的培养体；待测种群及敏感对照种子分别定量均勾缴播在土填表面，覆土约1cm，采用盆体底部渗灌方式补充水分，土壤相对湿度保持在60%～70%；置于25℃：15℃(D：N)，光周期12h：12h(L：D)条件下培养。待看麦娘长至2叶1心期，间苗，每盆保留长势一致的10株。4.2生物测定待植株长至3叶1心期，用待测除草剂（ACCase抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少设置5个剂量，每个剂量不少于4次重复，每个重复10株。施药21d后，调查每个处理的存活植株数、地上部分鲜重或干重，按公式(1)计算杂草株防效、鲜重或干重抑制率。Y-M,MeX 100 ·(1)式中;Y株防效、鲜重或干重抑制率，单位为百分号（%)；M,除草剂有效剂量Xga.i./hm处理后存活植数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或克(g);对照总株数、地上部分鲜重或干重的数值，单位为株或克（g）。以杂草株防效、鲜重或于重抑制率为指标，按公式（2)计算生长押制中量，D-C(2)式中：株防效、鲜重或千重抑制率，单位为百分号(%)；CY值下限，单位为百分号（%)；DY值上限，单位为百分号（%）； NY/T 3854—2021x除单剂有效剂量的数值，单位为克每公项（gu.i./hm）；GR so一生长排制中量的数值.单位为克每公项（ga.i./hm"）；斜率，按公式(3)计算抗药性倍数RI.GRsRI :GR ss(3)式中：R1-抗药性倍数；GRaR抗药性种群生长抑制中益的数值，单位为克每公项（g%i./hm")；GRrs敏感性种群生长抑制中量的数值，单位为克每公项（ga.i/bm"），4.3靶标基因检测4.3.1DNA提取取杂章幼策叶片.约200mg·采用1六烷基一甲基溃化铵(CTAB)法或高品化试剂盒提取总DNA。每个抗药性种群随机检测抗药性植株不少于10株，并单株检测。用1%琼脂糖凝胶电沐检测提取的DNA质量是否合格，电沫出现一条清晰明亮的条带，表明DNA较完整，无降解。DNA样晶的纯度及策度检测：用分光光度计测定DNA溶波在260nm处的吸光值（ODs），（D%等于1时.样品中DNA浓度为50g/ml，按公式(4)计算DNA浓度。Cra (ODs X A X 50 *式中：CINv-DNA浓度的数值.单位为微克每毫升（g/mL)；OD -DNA落液在260nm处的吸光值；A稀释倍数通过测定DNA游液在260nm和280nm处的暖光值(OD和OD×>检测DNA纯度.OD/ODs在1.7~2.0之间，表明DNA的纯