NYT 4352-2023 浆果类水果中花青苷的测定 高效液相色谱法.docx

ＩＣＳ 67.080.10 备案号：XXXX-XXXXCCS B 31 备案号：XXXX-XXXX 中华人民共和国农业行业标准 ＮＹ ／ Ｔ 4352—2023 浆果类水果中花青苷的测定高效液相色谱法 Determination of athocyanins in berry fruits by high performance liquid chromatography 2023 － 04 － 11 发布 2023 － 08 － 01 实施 中华人民共和国农业农村部 发 布 NY/T ４３５２—２０２３ 前 言 本文件按照 GB/T１１—２０２０?标准化工作导则 第１ 部分:标准化文件的结构和起草规则?的规定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出. 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口. 本文件起草单位:青岛农业大学、农业农村部果品质量安全风险评估实验室(青岛)、青岛市农产品质量安全中心、江苏徐淮地区徐州农业科学研究所、山东农业工程学院、青岛市现代农业质量与安全工程重 点实验室. 本文件主要起草人:聂继云、万浩亮、韩令喜、张佳、姜鹏、贾东杰、孟杰、原永兵、秦旭、刘晓丽、付红蕾、 魏亦山. Ⅰ NY/T ４３５２—２０２３ 浆果类水果中花青苷的测定 高效液相色谱法 １ 范 围 本文件规定了浆果类水果中花青苷测定的高效液相色谱法. 本文件适用于浆果类水果中１６种花青苷(附录 A)的测定. 本文件测定的 １６ 种花青苷中,矮 牵牛 素Ｇ３ＧOＧ葡 萄糖苷和芍药 素Ｇ３ＧOＧ葡 萄糖苷的线性范围为 ０５ mg/L~５０ mg/L,其余１４种花青苷的线性范围为０５ mg/L~１００ mg/L;以试样称样量为１g、定容体积为５０ mL 计,１６种花青苷的检出限和定量限详见附录 A. ２ 规范性引用文件 件仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单 件 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件. GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法 ３ 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４ 原 理 浆果类水果中的花青苷经盐酸甲醇溶液振荡提取,经反相色谱柱分离,紫外－可见光检测器或二极管 阵列检测器检测,以保留时间定性,外标法定量. ５ 试剂和材料 ５１ 除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T６６８２规定的一级水. ５２ 甲醇(CH３OH). ５３ 甲酸(HCOOH):色谱纯. ５４ 盐酸(HCl):３６％~３８％. ５５ 乙腈(CH３CN):色谱纯. ５６ 盐酸甲醇溶液:６ mL 盐酸(５４)和１９４ mL 甲醇(５２)混匀. ５７ 提取剂:５０ mL 盐酸甲醇溶液(５６)和４５０ mL 甲醇(５２)混匀. ５８ 流动相 A:５０ mL 甲酸(５３),用超纯水定容至１０００ mL. ５９ 流动相B:１０００ mL 乙腈(５５). ５１０ 标准品:纯度≥９５％,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质,相关信息见附录 A. ５１１ 单标储备溶液:准确称取５０ mg,用提取剂(５７)溶解并定容至５ mL,即为１０００ mg/L 的单标储备液,于－１８ ℃储存于密闭棕色玻璃瓶中,有效期６个月. ５１２ 混合标准工作液:将 单标储备溶液混合后,用 提取剂 (５７)作 为溶剂,逐 级稀释成 ０５ mg/L、 ５ mg/L、２０ mg/L、５０ mg/L、１００ mg/L、１２０ mg/L 的花青苷混合标准溶液,现用现配.根据浆果类水果种类,选择相应的单标储备溶液进行配制. ５１２ 微孔滤膜:０４５μm,有机相. ６ 仪器与设备 ６１ 高效液相色谱仪:配有紫外Ｇ可见光检测器或二极管阵列检测器. １ NY/T ４３５２—２０２３ ６２ 分析天平:感量为００１g和００００１g. ６３ 摇床:温度可控,转速２００r/min. ６４ 离心机:转速不低于５０００r/min. ６５ 冷冻研磨机:转速２５０００r/min. ７ 试样的制备与保存 ７１ 试样制备 果实洗净,擦干,取可食部分２００g,切碎混匀,用冷冻研磨机研成粉末. ７２ 试样保存 试样装入样品瓶中,密封,置－８０ ℃条件下冷冻保存. ８ 测定步骤 ８１ 提取 称取１００g试样于５０mL 离心管中,加入２０mL 提取剂(５７),混匀,置摇床上３０ ℃ ２００r/min振荡提取６０ min,５０００r/min 离心１０ min,将上清液转入５００ mL 棕色容量瓶中,残渣再用２０ mL 提取剂