细胞破碎的方法.ppt

细胞破碎的方法1、高速组织捣碎 ：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种 子等。2、玻璃匀浆器匀浆 ：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。3、超声波处理法 ：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，在 1KG至10KG频率下处理10-15分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。4、反复冻融法： 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。5、化学处理法： 有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好。无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸 （DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酥活 力，但不是全部，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。 产黄青霉 简介：产黄青霉属无性型真菌。分布于土壤、空气及腐败的有机材料等基物。最适生长温度为20-30°C。产生青霉素、多种酶类及有机酸，是重要的工业用真菌，也产生真菌毒素。 形态：菌落在CYA（查氏酵母膏琼脂）培养基上生长，25°C下7天生长至直径21-25 mm，具辐射状皱纹，边缘菌丝体白色，质地绒状，分生孢子结构大量，蓝绿色，有些许浅黄色渗出液和可溶性色素，菌落反面呈浅黄褐色。分生孢子梗发生于基质菌丝，孢梗茎100-300 × 3-4 um，壁平滑。帚状枝三轮生，偶尔双轮生或四轮生。每个帚状枝有副枝2-3个，14-20 × 3-4 um。梗基每轮3-5个，10-15 × 2.5-3.5 um，顶端稍膨大。瓶梗安瓿形，每轮4-7 个，7-10 × 2-2.7 um，梗颈较短。分生孢子球形、近球形、椭圆形或近椭圆形，2.5-3.6 × 2-3 um，淡绿色，光滑，分生孢子链稍叉开而成疏松的柱状。 用途：生产抗生素－青霉素；葡萄糖氧化酶；霉腐测验菌；橡胶腐蚀菌；有机酸Gluconic生产菌；杀虫剂降解菌； Ethylene生产菌；氨基酸－谷氨酸生产菌 * 产黄青霉的细胞破碎工艺 机械和非机械法相结合 第一步溶酶法 原理：利用细胞壁水解酶使细胞壁溶解，释放出胞内物质的方法。 优点：1 对设备要求低，能耗小； 2抽提的速率和收率高； 3 产品的完整性好； 4 对ph值和温度温度等外界条件要求低； 5 由于细胞壁被溶解，不残留碎片，有利于提纯。 第二步高压匀浆机破碎 *