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;一、 蛋白质的胶体性质;;蛋白质分子不能通过半透膜;利用透析(dialysis)可以把大分子蛋白质与小分子化合物分开;二、蛋白质的两性性质和等电点;蛋白质分子中的可解离基团;几种蛋白质的等电点;三、 蛋白质的变性作用和复性;导致蛋白质变性的因素 ;;蛋白质复性(renaturation) ;四、蛋白质的沉淀( protein precipitation );可逆沉淀作用;不可逆沉淀作用 ;五、蛋白质的紫外吸收;第六节蛋白质的分离纯化和测定;一、蛋白质分离纯化的一般原则;二、蛋白质分离纯化的基本步骤;2. 蛋白质的抽提;3. 蛋白质的分离——分离目的蛋白与杂蛋白;4. 蛋白质的纯化;(1)凝胶过滤(gel filtration);凝胶过滤的作用机制;常用凝胶; 凝胶过滤的过程;凝胶过滤的要点;(2)离子交换层析(ion exchange chromatography);支持介质(纤维素、凝胶等)
交换剂类型:阴离子交换剂、阳离子交换剂
常用阳离子交换剂羧甲基纤维素(CM-C);阴离子交换剂二乙氨基乙基纤维素(DEAE-C)。
;(3)亲和层析 ;配基(ligand)选择;配基的偶联;三、蛋白质分子量的测定;外;2. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS);聚丙烯酰胺凝胶;Acr:丙烯酰胺
Bis:双丙烯酰胺;十二烷基硫酸钠;SDS的作用 SDS与蛋白分子成比例结合→带负电荷复合物,消除不同蛋白间原有电荷差;;3. 超速离心;四、蛋白质的纯度鉴定 ;等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF); 双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis ;五、蛋白质含量的测定 ;一、 蛋白质的胶体性质;;蛋白质分子不能通过半透膜;利用透析(dialysis)可以把大分子蛋白质与小分子化合物分开;二、蛋白质的两性性质和等电点;蛋白质分子中的可解离基团;几种蛋白质的等电点;三、 蛋白质的变性作用和复性;导致蛋白质变性的因素 ;;蛋白质复性(renaturation) ;四、蛋白质的沉淀( protein precipitation );可逆沉淀作用;不可逆沉淀作用 ;五、蛋白质的紫外吸收;第六节蛋白质的分离纯化和测定;一、蛋白质分离纯化的一般原则;二、蛋白质分离纯化的基本步骤;2. 蛋白质的抽提;3. 蛋白质的分离——分离目的蛋白与杂蛋白;4. 蛋白质的纯化;(1)凝胶过滤(gel filtration);凝胶过滤的作用机制;常用凝胶; 凝胶过滤的过程;凝胶过滤的要点;(2)离子交换层析(ion exchange chromatography);支持介质(纤维素、凝胶等)
交换剂类型:阴离子交换剂、阳离子交换剂
常用阳离子交换剂羧甲基纤维素(CM-C);阴离子交换剂二乙氨基乙基纤维素(DEAE-C)。
;(3)亲和层析 ;配基(ligand)选择;配基的偶联;三、蛋白质分子量的测定;外;2. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS);聚丙烯酰胺凝胶;Acr:丙烯酰胺
Bis:双丙烯酰胺;十二烷基硫酸钠;SDS的作用 SDS与蛋白分子成比例结合→带负电荷复合物,消除不同蛋白间原有电荷差;;3. 超速离心;四、蛋白质的纯度鉴定 ;等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF); 双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis ;五、蛋白质含量的测定
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