演示文稿土壤中分解尿素的细菌的分离与计数已用.pptVIP

（五）微生物的培养与观察并计数 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度和培养时间。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 特别注意的几个具体操作 当前第31页\共有57页\编于星期四\3点 微生物的培养与观察 关注菌落的形状、大小、隆起程度、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 当前第32页\共有57页\编于星期四\3点 当前第33页\共有57页\编于星期四\3点 〖注意〗研究未知的微生物，一定要注意进行规范的无菌操作，以防被致病的微生物感染，实验后，一定要洗手。 （六）鉴定：筛选后必鉴定 鉴定（鉴别）培养基：加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存。 1、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌是否存在 2、伊红—美蓝培养基：鉴定大肠杆菌是否存在 特别注意的几个具体操作 当前第34页\共有57页\编于星期四\3点 1、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 2、伊红—美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→ 菌落呈深紫色并带有金属光泽。 鉴定（鉴别）培养基的实例： 当前第35页\共有57页\编于星期四\3点 1.实验设计和操作提示 步骤 实验操作 操作提示 土壤 取样 从酸碱度接近 潮湿的土壤中取样。先铲去表层土_____左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过____ 制备 培养基 分别配制牛肉膏蛋白胨培养基和 为唯一氮源的 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了 作用 3 cm 选择 灭菌 选择 中性 尿素 对照 填一填 当前第36页\共有57页\编于星期四\3点 样 品 的 稀 释 和 涂 布 ①称取 g土样加到盛有 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀； ②吸取上清液 mL，转移至盛有 mL的无菌水的无菌大试管中，按照上图流程进行样品的稀释； ③按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 mL进行 操作。按照浓度 到 的顺序涂布平板，不必更换移液管 ①应在 旁称取土样； ②由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围 ______倍的稀释液； ③实验时要对所用的平板、试管作好 。如培养皿要注明培养基类型、培养时间、 、培养物等 高 稀释度 10 90 1 9 0.1 平板涂布 低 火焰 103～107 标记 当前第37页\共有57页\编于星期四\3点 培 养 将涂布好的培养皿放在______ ℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显____ 选择培养基上的数目，才说明选择培养基有____作用 30～37 选择 多于 当前第38页\共有57页\编于星期四\3点 计 数 当菌落数目____ 时，选取菌落数在__ 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对 ___个平板进行重复计数，然后求出_ ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目 ①如果得到了____________菌落数目符合要求的平板，则说明稀释操作比较成功； ②如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明实验不精确，需要___ ； ③在菌落计数时，每隔24 h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 平均值 重新实验 稳定 30～300 3 2个或2个以上 当前第39页\共有57页\编于星期四\3点 三、操作提示 无菌操作 做好标记 制定计划 四、结果分析与评价 （一）如何判断培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？ 　　 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。 牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择