实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验.pptxVIP

实验十一T淋巴细胞玫瑰花结实验;实验 十 一 T淋巴细胞玫瑰花结实验 ;一、实验目的; 人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体,在体外一定条件下将人淋巴细胞与绵羊红细胞两者混合,可以形成以T细胞为中心,周围黏附着多个绵羊红细胞的花环,为E花环试验(erythrocyte rosette test)。应用最广的有总E花环试验(Et,t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea,a为active 的缩写)。Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数,Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数,这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。 E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。;;三、实验仪器、材料和试剂;三、实验仪器、材料和试剂;三、实验仪器、材料和试剂;四、方法与步骤;四、方法与步骤;密度梯度离心分离纯化淋巴细胞示意图;;四、方法与步骤;3.反应：取淋巴细胞悬液（5×106个/ml）0.1ml；加入灭活吸收的小牛血清0.1ml，再加入2×107 个/ ml绵羊红细胞悬液0.2ml混匀；使淋巴细胞与绵羊红细胞的比例分别为1：8（活性玫瑰花结）。置37℃孵育5min，其间轻轻摇动2~3次。 取出离心管，以500 r / min离心5min，将离心管置40冰箱放置5min。 取出后轻轻旋转混匀（切不可甩动试管，以免花 环脱落）。沿管壁加入0.8%戊二醛溶液3滴，再轻 旋转混匀。置4℃，5min。 自冰箱取出后，以500 r / min离心5min，弃 上清，沉淀混匀制片。;4、制片 取1滴标本悬液滴于载玻片上（载玻片事先浸在蒸馏水中置4℃冰箱），使悬液自然均匀铺开，待自然干燥或微风吹干后，用瑞氏染液染色5~10min。用自来水冲去染液，待干燥后镜检计数。 5、计数方法 在高倍镜或油镜下数200个淋巴细胞，每个淋巴细胞结合3个以上的绵羊红细胞为玫瑰花结形成细胞。形成玫瑰花结的淋巴细胞数目以百分率表示。;五、实验结果;1.一定要用新鲜血，否则会影响细胞活性，且红细 胞受体会从T细胞表面脱落。 2.计数前，重悬和混匀细胞要轻柔，否则花结会散 开消失。;感谢您的欣赏