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实验一植物基因组DNA提取; 植物基因组DNA的提取 ;一、实验目的:
1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般
原理。
2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
;二、一般原理
提取DNA的一般原理,是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚:氯仿:异戊醇抽提的方法去除蛋白质,得到的DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。;三、材料 玉米叶片
四、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,1.5 mL 离心管。; 五、试剂
提取缓冲液: 100mmol/L Tris·Cl,20mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl,1.5% SDS。
氯仿:异戊醇:乙醇(80:4:16)。
TE缓冲液:10mmol/L Tris·Cl(pH8.0),1mmol/L EDTA(pH8.0)。
其他试剂:液氮,异丙醇,无水乙醇,70%乙醇,3mol/L NaAc(pH5.2)。 ; 六、操作步骤
在1.5ml离心管中加入1ml提取缓冲液,60℃水浴预热。
取玉米幼叶0.1g,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,摇动混匀,60℃水浴保温3min,每隔一分钟摇动一次。
12000rpm 离心1min。
吸取900ul上清液到一个新的1.5ml离心管中,加入600ul的氯仿:异戊醇:乙醇(80: 4 :16)溶液,颠倒混匀室温下静置1 min,使水相和有机相分层。
室温下12000rpm离心5 min。
;;DNA的紫外分光光度计检测;感谢您的欣赏
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