发酵菌种选育.pptxVIP

发酵菌种选育;带图象分析系统的微生物菌种显微观察装置 ;第一节 菌种的分离 ;二、优良菌种的性能 ;三、分离思路 ;定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。;菌种筛选主要步骤;原种斜面 ↓确定发酵培养基础条件 筛选  ↓ 初筛（1株1瓶） ↓ 复筛（1株3～5瓶） ↓结合初步工艺条件摸索 再复筛（1株3～5瓶） ↓ 3～5株 ↓单株纯种分离 ↓ 生产性能试验 ↓→毒性试验菌种鉴定; （一）采样;;2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。;（二）增殖培养;（三）培养分离;1.稀释平皿分离法;1.稀释平皿分离法;2.平皿划线分离法 a. 分区划线分离法 b. 连续划线分离法 ;（四）筛 选;（五）毒性试验;第二节 培养分离;一、成功的分离培养方法;二、将生态学方法用于培养分离的一般思路要点; 5．列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的几丁质、葡萄表皮的果胶； 6．根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件； 7．用标准方法作对照来评价生态学分离方法； 8．根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法； 9．运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。; (一) 采样和采集方法;采样的注意事项;(二)生态学参数及培养基的组成原则;3、所有分离培养基中都应???有抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1， 以抑制真菌的生长。 4、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天。 5、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。 ;（二）、分离;用刚果红染色法鉴定筛选降解纤维素的菌株 ;四、放线菌的分离培养基的组成原则;放线菌的分离;次代培养及纯化; 放线菌菌落形态;五、真菌分离;4、选择性富集：是通过一定的方式使样本中一种或一群微生物数量上的增加而利于分离的一种技术。 富集可以是种水平的，如通过营养要求的改变来富集分离镰刀菌；也可以是组成群水平的，如以纤维素为唯一碳源的选择性培养基可选择性富集所有能降解纤维素的纤维素裂解微生物。 5、在分离培养基中加入一定的抗生素即可有效地抑制细菌生长及菌落形成。;真菌的分离方法;六、生产选种;七、 工业菌种的育种方针;工业菌种育种的方法;育种过程;选择育种方法时综合考虑的因素;工业菌种改良方法;(4)抑制或消除产品分解酶。 (5)改进菌种外泌产品的能力。 (6)消除代谢产品的反馈抑制。如诱导代谢产品的结构类似物抗性。 ; 提高特定基因的表达水平; 改进菌种的生长效率;第三节 工业微生物育种;诱变; 一、诱变剂和诱变处理;超净工作台;化学诱变剂： 化学因子如碱基类似物、5—氟尿嘧啶、烷化剂等。 化学诱变剂中使用最多、最有效的是烷化剂。 使用化学诱变剂的优缺点： 1、大多数情况下，就突变数量而言，要比电离辐射更有效。;2、化学诱变剂是很经济的，因为只需要少量的合适的诱变剂，设备是实验室的一般玻璃器皿，一个蒸气罩。而用电离辐射±行工作时，设备费用大，并要注意安全性。 3、大部分诱变剂是致癌剂，所以在使用中必须非常谨慎，要避免化学诱变剂与皮肤接触，，且切勿吸入其蒸气，有人对某些诱变剂极其敏感，甚至未直接接触就会过敏，这就更要当心。 ;诱变剂的选择;3．吖啶类诱变剂可以造成生化代谢途径的完全中断。 4．紫外线仍十分有效。电离辐射是造成染色体巨大损伤的最好诱变剂，它能造成不可回复的缺突变。但它可能影响邻近基因的性能。 ;二、诱变育种步骤;(一)目的菌株的选择; 5．要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细胞体来作出发诱变细胞，这是由于变异性状大部分是隐性的，特别是高产基因。 6．根据采用的诱变剂或根据细胞生理状态或诱变谱选择诱变剂，因为同一诱变剂的重复处理会使细胞产生抗性，使诱变效果下降。有的诱变剂是作用于营养细胞，就要选