生物化学实验淀粉酶活力测定.pptxVIP

第1页/共72页生物化学实验淀粉酶活力测定第2页/共72页实验内容1.　淀粉含量测定2.　氨基酸的纸上层析3.　蛋白质分子量测定4.　淀粉酶活力测定 5.　蛋白质含量测定6.　甲醛滴定测氨基氮 7.　酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定8. 赖氨酸含量测定9. 凝胶层析法分离蛋白质10. 蔗糖酶的提取与部分纯化11. 蔗糖酶活力的测定12. Bradford法测定蛋白质含量第3页/共72页教学目的 生物化学是专业基础实验课，其先修课程为无机化学、分析化学和有机化学 。其目的是：学习和掌握生物技术，培养动手观察和思维能力。第4页/共72页学习方法1、预习：实验前必须进行充分的预习和准备，并写出预习报告，做到心中有数，这是做好实验的前提。2、操作：应按拟定的实验操作计划与方案进行。做到轻（动作轻、讲话轻），细（细心观察、细致操作），准（试剂用量准确、结果及其记录准确），洁（使用的仪器清洁，实验桌面整洁，实验结束把实验室打扫清洁）。3、在实验全过程中，应集中注意力，独立思考解决问题。自己难以解释时可请老师解答。4、写实验报告：做完实验后，应解释实验现象，并作出结论，或根据实验数据进行计算和处理。主要包括：a、目的，b、原理，c、操作步骤及实验性质、现象，d、数据处理（含误差原因及分析），e、讨论，f、思考题回答。第5页/共72页实验室守则　生物化学实验室守则是学生实验正常进行的保证，学生进入实验室必须遵守以下规则：1. 进入实验室，须遵守实验室纪律和制度，听从老师指导 2. 未穿实验服、未写实验预习报告者不得进入实验室进行实验。3. 进入实验室后，要熟悉周围环境，熟悉防火及急救设备器材的使用方法和存放位置，遵守安全规则。 4. 实验前，清点、检查仪器、明确仪器规范操作方法及注意事项，否则不得动手操作。5. 使用药品时，要求明确其性质及使用方法后，据实验要求规范使用。禁止使用不明确药品或随意混合药品。6. 实验中，保持安静，认真操作，仔细观察，积极思维，实验过程中必须有原始记录，不得擅自离开岗位。7. 实验室公用物品（包括器材、药品等）用完后，应归放回原指定位置。实验废液、废物按要求放入指定收集器皿。8. 爱护公物，注意卫生，保持整洁，节约用水、电、气及器材。9. 实验完毕后，要求整理、清洁实验台面，检查水、电、气源，打扫实验室卫生。 10.?实验记录经教师签名认可后，方可离开实验室。 第6页/共72页实验一　淀粉含量测定一、实验目的1.　掌握旋光仪的操作使用。 2.　了解旋光法测粗淀粉的基本原理。二、实验原理 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。第7页/共72页三、实验仪器和试剂1、主要仪器：（1）旋光仪（2）电子天平（感量0.0001g）2、试剂： ⑴1％盐酸溶液 ⑵30％硫酸锌溶液。 ⑶15％亚铁氰化钾溶液。第8页/共72页四、实验步骤1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热15min→先加1ml 30% ZnSO4混匀→再加1ml 15%亚铁氰化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初15ml收集其余滤液。2.旋光度测定 取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α第9页/共72页六、思考题样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或多于15min会对测定结果产生什么影响？第10页/共72页五 、 结果计算其中：表1－1不同谷物淀粉的比旋光度品种品种小麦182.7马铃薯195.4黑麦184.0小米171.4大麦181.5荞麦179.5水稻185.9燕麦181.3玉米184.6[α]D20第11页/共72页实验二　氨基酸的纸上层析　一、实验目的 通过对氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。二、实验原理 纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的－OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到分离。第12页/共72页三、仪器和试剂1、主要仪器：（1）层析缸（2）微量进样器（3）喷雾器2、试剂 ：（1）展开剂：乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1 （2）氨基酸溶液：0.5%的赖氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶液及它们的混合液 （3）显色剂：0.1%水合茚三酮丙酮溶液。第13页/共72页四、实验步骤1、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1）放入培