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蛋白质续的学习教案; ; 分支肽中有N端和C端。 N端和C端氨基酸的性质不同，可用于氨基酸顺序测定。;1. N端氨基酸测定 (1). DNP法 N端氨基酸中的-NH2与2,4-二硝基氟苯缩合，形成牢固化学键，不受蛋白质水解破坏。而酰胺键容易水解。 ;(2). 丹磺酰法 丹磺酰(dansyl method)法较DNP法更灵敏。常用丹磺酰氯作试剂，与蛋白质中N端氨基反应，而丹磺酰基有很强的荧光，通过测定荧光便可测定微量的N端氨基酸。 ; ;(3). Edman法 用异硫氰酸苯标记N端氨基酸，然后用酸除去标记的氨基酸，肽链上出现新的N端。再标记，再除去。从而测定整个肽链的氨基酸顺序。;2. C端氨基酸测定 (1). 肼解法 ;(2). 羧肽酶法(carboxy-peptidase method) 这种酶只作用于C端肽键，水解肽链上的最后一个氨基酸，使它脱落。;二、蛋白质结构的现代概念 1. 蛋白质的一级结构 ;2. 蛋白质的二级结构 ; ;3. 蛋白质的三级结构 ;4. 蛋白质的四级结构 ;第三节 蛋白质的性质与分离; ;二、蛋白质的酸碱性与电泳 以P表示蛋白质，在溶液中蛋白质存在下列离解平衡，; 控制缓冲溶液pH值，进行电泳，便可分离蛋白质。;毛细管电泳(capillary electrophorresis, CSE). 毛细管电泳是目前分离效率最高的分离方法，广泛用于蛋白质的分离提纯。; ;三、蛋白质的胶体性质与沉淀分离 蛋白质溶液是胶体溶液，颗粒直径在1 ～ 100 nm之间。靠水化膜和静电作用维持胶体溶液的稳定。; 利用蛋白质胶体性质可分离蛋白质。 1. 盐析法分离蛋白质 在蛋白质溶液中加(NH4)2SO4等强电解质，通过调节加入量，可使蛋白质分级盐析(fractional salting out)。例如，血浆中球蛋白质用50%饱和度(NH4)2SO4沉淀，血浆中清蛋白质用100%饱和度(NH4)2SO4沉淀。 盐析法优点：保持蛋白质活性；纯度较高。;2. 有机溶剂沉淀分离蛋白质 采用能与水相溶混的有机溶剂可使蛋 白质脱水沉淀。 3. 调节等电点分离蛋白质 利用蛋白质等电点差异，可分离单种 蛋白质。 四、蛋白质变性 天然蛋白质因物理因素或化学因素影响，分子内部原有高度规律结构发生变化，使蛋白质失去生物活性，理化性质随之改???，但一级结构不变的现象，称为蛋白质变性。;注意：蛋白质沉淀、蛋白质凝固与蛋白质变性. 蛋白质沉淀不等于蛋白质变性。 蛋白质凝固必然变性。;(1). 使蛋白质变性的因素： 加热 辐射 超声波 高压 强酸 强碱 有机溶剂 重金属 (2). 蛋白质变性的利用： 消毒 防病与治病 ;五、蛋白质的显色反应 1. 定性分析 (1).双缩脲反应：是酰胺键的反应。 双缩脲在碱性溶液中与CuSO4反应，生成红紫色络合物。 ;(2). CuSO4反应：蛋白质与CuSO4反应，显红紫色。 (3). HNO3反应：含芳香族氨基酸和杂环氨基酸的蛋白质，特别是含酪氨酸和色氨酸的蛋白质所特有的反应。 (4). 米伦反应：利用米伦试剂(Hg(NO3)2、Hg2(HO3)2、HNO3、HNO2混合物)与蛋白质反应，生成白色沉淀，加热后转变为红色。;(5). 乙醛酸反应：在蛋白质溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁缓缓加入浓硫酸，在两层间呈现紫色环。 2. 定量分析 蛋白质与有机试剂反应，生成有色复合物，采用可见分光光度法可定量测定蛋白质的含量。 有机试剂有下列类型：;(1).偶氮类化合物：主要是变色酸类偶氮化合物。 还有铍试剂I、铍试剂III、铍试剂IV。; 还有偶氮氯膦I 、偶氮氯膦II、 偶氮氯膦III、偶氮胂I 、偶氮胂III、氯磺酚S等。 ; (2). 茜素类化合物： 这类试剂与蛋白质复合物的?值达105 ;(3). 三苯甲烷类试剂：有溴甲酚绿、溴酚蓝、荧光素、铬天青S等。 ; 我们在这方面的研究成果： (1). 张正奇. “用偶氮胂M分光光度法测定蛋白质”，分析科学学报，2001，17(3)：214-216. (2). 杨平华，张正奇. “7-苯基偶氮-变色酸与蛋白质的显色反应研究”. 分析科学学报，2002,5. (3). 张正奇，吕喜凤. “蛋白质的电化学特性研究”， 湖南大学学报，2002，29(2)：72-74. (4). 张正奇，熊