ELISA基础知识和须知事项.ppt

加样和稀释 加样本的准确性（个人因素和实验条件） 尽可能排除主关因素（尽可能用加样枪，避免直接使用滴瓶） 各种试剂盒标本的稀释使用，严格按照说明是操作 ELISA基础知识和须知事项 ELISA基础知识和须知事项 ELISA基础知识和须知事项 ELISA基础知识和须知事项 类容 ELISA的基本原理和相关概念 特别说说捕获法 ELISA结果的影响因素 ELISA结果的处理 ELISA基础知识和须知事项 ELISA的基本原理和相关概念 将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或 抗体后，这种酶标抗原或抗体既能保留与相应抗体或抗原结合的免疫活性，又同时保留酶的活性。 由于酶具有很高的催化效率，因此可放大抗原抗体反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感性。 ELISA基础知识和须知事项 ELISA的基本原理 抗原或抗体在体外结合到某种固相载体表面后，仍然能保持其免疫学活性而能相互特异性结合。 ELISA基础知识和须知事项 抗原抗体复合物与酶标的二抗结合，加入合适的底物在酶的作用下显色，颜色的深浅与特异性抗体水平成比例关系，可进行定性和定量分析。 ELISA基础知识和须知事项 ELISA的分类 测抗原：竞争法（也可用于测抗体）、双抗体夹心法。 测抗体：间接法、捕获法、双抗原夹心法 ELISA基础知识和须知事项 竞争法elisa 竞争法ELISA原理——标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，标本中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原越少，显色越浅。 要用于小分子抗原或半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定。 ELISA基础知识和须知事项 包被特异性抗体 酶标抗原 检测抗原 孵育 洗涤后显色 加样 A B 竞争法ELISA 3.显色 3.孵育 1.加样 ELISA基础知识和须知事项 双抗体夹心法 双抗体夹心法ELISA ——将特异性抗体包被于固相载体表面，与标本中相应抗原相结合，洗涤后再加入酶标的第二特异性抗体与抗原结合，加入底物后显色。 检测测抗原要有至少具有2个抗原决定簇 ELISA基础知识和须知事项 包被特异性抗体 双抗体夹心法ELISA 检测抗原 1.加样 2.孵育 3.洗涤 4.加入二抗 5.孵育 6.显色 酶标特异性抗体 ELISA基础知识和须知事项 双抗原夹心法 双抗原夹心法ELISA——检测标本中的总抗体（包括IgM和IgG型抗体） 。将特异性抗原包被于固相载体表面，与标本中特异性IgM和IgG型抗体结合，洗涤后加入酶标的特异性抗原与相应的抗体结合，洗涤后加入底物显色 ELISA基础知识和须知事项 3.洗涤 1.加样 2.孵育 6.显色 5.孵育 4.加入酶标 抗原 双抗原夹心法ELISA ELISA基础知识和须知事项 间接法 间接法 ELISA（Indirect ELISA）——将特异性抗原包被于固相载体表面，与标本中相应特异性抗体结合，洗涤后再加入酶标的抗人IgG或IgM抗体与之结合，洗涤后加入底物显色。 酶标二抗是针对一类免疫球蛋白分子 只需要变换包被抗原，就可用一种酶标二抗检测各种与抗原结合的抗体 ELISA基础知识和须知事项 1.加样 2.孵育 3.洗涤 4.加入二抗 5.孵育 6.显色 间接法ELISA ELISA基础知识和须知事项 捕获法 ELISA（Capture ELISA）——专门用来检测IgM型抗体的方法。将抗人IgM抗体包被于固相载体表面，与标本中所有人IgM抗体结合，洗涤后加入特异性抗原与相应的特异性IgM抗体结合，洗涤后再加入酶标的抗原特异性抗体与之结合，洗涤后加入底物显色。 ELISA基础知识和须知事项 1.加样 2.孵育 3.洗涤 4.加入抗原 孵育 5.加入二抗 孵育 6.显色 捕获法ELISA ELISA基础知识和须知事项 区别理解 检测抗原？抗体？ 包被什么？ 标记什么？ ELISA基础知识和须知事项 间接法和捕获法比较 间接法：假阴性，假阳性 捕获法：酶标抗体的要求较高 ELISA基础知识和须知事项 间接法的假阳性 麻疹IgG 麻疹 抗原 麻疹IgM 抗人酶标 IgM抗体 类风湿因子 阳性结果 假 阳 性 结 果 ELISA基础知识和须知事项 间接法的假阴性 麻疹IgG 麻疹 抗原 麻疹IgM 酶标抗人 IgM抗体 阳性结果 假阴性结果 ELISA基础知识和须知事项 ELISA的有关名词概念 质控血清：质控血清是为了对实验结果进行控制而配制的血清。质控血清可以是定值也可以是不定值，可以购置也可以自配。自己配制时要注意选用无脂血的血清或血浆，不能用试剂盒内的阳性对照。若用稀释的血清作为质控血清，应考虑稀释基质成分对结果的影响。因质控血清与临床标本不一致，应该注意对结果的分析，应该注意质控血清只能用于