HG_T 4207-2011 工业循环冷却水异养菌菌数测定 平皿计数法.docx

ICS 13.060.70 HGG 76 HG 备案号：34608—2012 中华人民共和国化工行业标准 HG/T 4207—2011 工业循环冷却水异养菌菌数测定 平皿计数法 Examination of heterotrophic bacteria in industrial circulating cooling water—standard of plate count 2011- 12-20发布 2012-07-01 实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 I HG/T 4207—2011 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会水处理剂分技术委员会(SAC/TC63/SC5) 归口。 本标准由中海油天津化工研究设计院、深圳市华测检测技术股份有限公司、上海未来企业有限公 司、天津正达科技有限责任公司负责起草。 本标准主要起草人：张全、郭勇、刘昕、朱传俊、邵宏谦。 HG/T 4207—2011 工业循环冷却水异养菌菌数测定 平皿计数法 1 范围 本标准规定了工业循环冷却水异养菌菌数的测定方法。 本标准适用于工业循环冷却水中异养菌菌数的测定，也适用于原水、生活用水及其他水中异养菌菌 数的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备(neq GB/T 603—2002,ISO 6353-1: 1982) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(mod GB/T 6682—2008,ISO 3696:1987) 3 方法提要 本方法采用平皿计数法，将待测水样用10倍稀释法稀释至需要的稀释度，用移液管将不同稀释度 试样1mL 分别接种到无菌培养皿中，将冷却至(45±1)℃灭菌后的培养基10 mL～15mL 灌入培养皿 内，混合均匀。待固化后置于(29±1)℃生化培养箱中培养72 h,培养期满后按照计数方法进行计数。 4 试剂和材料 4.1 牛肉膏(生物试剂)。 4.2 蛋白胨(生物试剂)。 4.3 琼脂(生物试剂)。 4.4 氢氧化钠溶液(40 g/L)。 4.5 乙醇溶液[75 %(体积分数)]。 4.6 氯化钠. 4.7 牛皮纸。 4.8 医用脱脂棉。 4.9 医用脱脂纱布。 4.10 硫代硫酸钠. 5 仪器、设备 5.1 常规微生物实验设备. 5.2 无菌箱(室)或超净工作台. 5.3 蒸汽压力灭菌锅。 5.4 生化培养箱：(0～50)℃±1℃。 5.5 电热干燥箱：温度可控制在(60～280)℃±2℃。 5.6 玻璃培养皿或一次性灭菌塑料培养皿：d90 mm。 5.7 刻度吸管：1mL。 5.8 刻度吸管：10 mL。 2 HG/T 4207—2011 5.9 试管(做盐水管用)d20 mm×200 mm。 5.10 磨口试剂瓶：1000 mL。 5.11 搪瓷量杯：1000 mL 5.12 锥形瓶：500 mL。 6 实验前的准备 6.1 培养基的制备 6.1.1 称取下列试剂：牛肉膏3.0g, 蛋白胨10.0g, 氯化钠5.0g, 琼脂15 g～20 g. 6.1.2 将上述试剂加水约950mL, 在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯 中，用热水补充至1000 mL, 用氢氧化钠溶液调节 pH 值至7.2～7.4,并分装在500mL 锥形瓶中，每瓶 分装量不超过其容积的三分之二。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌锅于(121±1)℃ 灭菌15 min～30 min。 注：亦可直接购买市售的营养琼脂作为培养基。 6.2 无菌稀释水的制备 6.2.1 生理盐水的配制：称取8.5 g 氯化钠，溶解在1000 mL 水中，混匀。 6.2.2 将生理盐水分装在试管中，每管9 mL, 塞上棉塞，用牛皮纸把试管口包好，用蒸汽压力灭菌锅于 (121±1)℃灭菌15 min～30 min。 6.3 刻度吸管的灭菌 6.3.1 将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10 mm～15 mm,棉花不 宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。 6.3.2 每支刻度吸管用一条约40 mm～50mm 宽的牛皮纸条，以45°左右螺旋形卷起来，吸管的尖部 在头部，粗端将多余的纸条折叠打结，不