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ICS 65.020.01 B 04
宁 夏
DB64
回 族 自 治 区 地 方 标 准
DB 64/ T 1139—2015
枸杞中总黄酮含量的测定
高效液相色谱法
· Determination of total content of flavonoids in the wolfberry—HPLC methor
2015- 11-30发布 2 0 1 5 - 1 1 - 3 0 实 施
宁夏回族自治区质量技术监督局 发布
DB64/ T 1139—2015
前 言
本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写》的要求。
本标准由宁夏农林科学院提出。
本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。
本标准主要起草单位:宁夏农产品质量标准与检测技术研究所 宁夏农林科学院。 本标准主要起草人:王晓菁、吴燕、牛艳、张锋锋、姜瑞、白小军。
工
1
DB64/ T 1139—2015
枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了高效液相色谱法测定枸杞中总黄酮的测定方法。
本标准适用于枸杞中总黄酮含量的测定。
本方法检出限为5mg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用本文件。 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
样品用70%甲醇溶液超声提取,用液相色谱-紫外检测器在波长360nm处测定,外标法定量。
4 试 剂
除非另有规定,本法所使用试剂均为分析纯。
4.1 水:GB/T 6682, 一级。
4.2 甲醇:色谱纯。
4.3 70%甲醇溶液。
4.4 芦丁标准品:纯度≥98%。
4.5 芦丁标准溶液:准确称取一定量的芦丁标准物质(精确到0.0001g) 用70%甲醇溶液溶解并 定容,配制成10.00mg/mL标准储备液。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪 (HPLC): 配有紫外检测器。
5.2 超声波清洗器。
5.3 离心机:4000 r/min。
5.4 高速万能粉碎机:10000 r/min。
5.5 分析天平:感量±0.0001g。
5.6 微孔滤膜:有机相,0.45 μm。
6 试样的制备
2
DB64/ T 1139—2015
枸杞试样:样品于-18℃冷冻冰箱中保存。试验时将样品取出,立即用高速万能粉碎机(可加少量 的液氮)粉碎(30g样品粉碎时间为30s), 置于样品瓶中, -18℃冷冻备用。
7 试样提取
精确称取1g (精确到0.001g) 粉碎的枸杞样于100mL离心管中,加70%甲醇溶液25mL, 摇匀,放置 超声波中超声提取60min (期间振摇2次-3次),取出后在4000r/min转速下离心10min,上清液过0.45 μm 微孔滤膜过滤,供高效液相色谱-紫外检测器测定。
8 高效液相参考条件
a) 色谱柱: XBridge C18柱”,250mm×4.6mm(i.d),5.0um, 或相当者;
b) 柱温:30℃;
c) 流动相:甲醇-4%甲酸溶液,详细梯度洗脱条件见表1;
d) 流速:1.0mL/min;
e) 波长:360nm;
f) 进样量:10μL。
表1 流动相详细梯度洗脱条件
时间/min
甲醇/V
4%甲酸溶液/V
0
50
50
15.0
50
50
15.1
80
20
25.0
80
20
25.1
50
50
9 标准曲线的绘制
用70%甲醇溶液将芦丁标准溶液逐级稀释得到浓度为0、5、10、20、50、100、200ug/mL的标准工作 液,依次由低到高进样检测,质量浓度X(ug/mL)为横坐标,以响应值(峰面积)Y为纵坐标进行线性回 归,得到标准曲线回归方程。
10 测定
待测液中芦丁的响应值应在标准曲线范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。同时做空白试 验。
11 结果计算
试样中总黄酮含量以芦丁的质量分数w计,单位以毫克每千克 (mg/kg) 表示,按式(1)计算:
1) 色谱柱是由Waters公司提供的产品。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。 如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。
3
DB64/T 1139—2015
式中:
.. (1)
一试样中总黄酮的含量,单位为毫克每千克 (mg/kg);
c 一从标准曲线上查得待测液中总黄酮的质量浓度,单位为微克每毫升 (ug/mL);
V— 试样中加入的提取溶液体积,单位为毫升 (mL);
m— 试样的质量,单位为克
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