实验二补骨脂黄酮体的提取分离及鉴定.pptxVIP

实验二补骨脂黄酮体的提取分离及鉴定第1页/共27页第2页/共27页实验二、补骨脂黄酮体的提取、分离及鉴定第3页/共27页实验目的和要求掌握补骨脂黄酮体的提取分离原理及操作： 溶剂法提取、聚酰胺柱色谱分离熟悉黄酮类化合物在聚酰胺上的吸附规律与结构的相互关系。第4页/共27页不同层析系统原理硅胶：是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，硅胶为极性吸附剂，化合物的极性越强，吸附剂对其吸附能力就越强；洗脱剂的极性越大，其洗脱能力就越强。聚酰胺：由酰胺键聚合形成的高分子化合物。当所分离化合物的结构与聚酰胺形成氢键的能力越强，其吸附越强，越难洗脱。其用途比较广，基本上各种类型化合物都能使用。第5页/共27页聚酰胺具有“双重色谱”性能之故，即其分子中既有非极性的脂肪链，又有极性的酰胺基团，当用极性移动相（如含水溶剂系统）洗脱时，聚酰胺作为非极性固定相，其色谱行为类似反相分配色谱，因黄酮苷比游离黄酮极性大，所以苷比游离黄酮容易洗脱。当用有机溶剂（如氯仿-甲醇）洗脱时，聚酰胺作为极性固定相，其色谱行为类似正相分配色谱，因游离黄酮的极性比黄酮苷小，所以游离黄酮比黄酮苷容易洗脱。第6页/共27页苷与苷元聚酰胺色谱 聚酰胺“双重色谱”原理 正相色谱 反相色谱聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团） 非极性固定相（非极性脂肪链）洗脱剂：有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小） 含水溶剂（甲醇-水，极性大）先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小） 苷（极性大）（柱色谱分离） Rf值： 苷元 苷 苷元 苷（TLC色谱鉴别）***上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层上的行为。第7页/共27页聚酰胺层析系统原理 其酰胺基可与酚羟基、羧基、羰基、硝基等形成氢键吸附。第8页/共27页聚酰胺是分离黄酮类化合物的比较理想的吸附剂，其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中酚羟基的数目、位置以及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。黄酮类化合物从聚酰胺色谱柱上洗脱大致遵循下列规律： 第9页/共27页A. 化合物中酚羟基数目越多，被聚酰胺吸附越牢，越难洗脱。 酚羟基数目相同时，聚酰胺对邻位羟基吸附弱于间、对位，容易洗脱。 B. 共轭系统多的形成氢键能力强，因此黄酮类化合物骨架不同，聚酰胺的吸附能力也不同，吸附能力从小到大依次为：异黄酮 二氢黄酮 黄酮 黄酮醇 第10页/共27页C. 有分子内氢键的羟基吸附弱 .D. 苷元相同，洗脱顺序一般是：叁糖苷，双糖苷，单糖苷，苷元 第11页/共27页2318O1247365645O黄酮定义：两个苯环（A与B环）通过三个碳原子相互联结而成的一系列化合物。（C6-C3-C6）母核：2—苯基色原酮分布：多存在于高等植物中，是数量最多的天然酚性化合物。第12页/共27页性质1．酸性 （1）来源：酚羟基（ 数目、位置） （2）酸性规律 a、7，4‘-OH酸性强于其他位置羟基的酸性（处于羰基对位，羰基的共轭诱导）。 b、5-OH酸性最弱（处于羰基邻位，形成分子内氢键）。 c、酚羟基数目越多，酸性越强。第13页/共27页应用：pH梯度法分离 7，4′-OH 7或4′-OH 其他位-OH 5-OHNaHCO3 +---Na2CO3++--NaOH++++第14页/共27页2.碱性： γ-吡喃酮环1-氧原子 微弱碱性（孤对电子，接受质子） 仅溶于强的、浓酸+水 （浓硫酸） 烊 盐（呈色） 应用 初步鉴别黄酮母核类型：黄酮、黄酮醇 —— 黄~橙色，并有荧光 二氢黄酮 —— 橙红（冷）、紫红（热） 查耳酮 —— 橙红~洋红 异黄酮（二氢）—— 黄色 橙酮 —— 红~洋红第15页/共27页显色反应 1．还原显色反应反应类型 鉴别特征 鉴别意义 备注 盐酸-镁粉 黄酮、二氢黄酮、 红~紫红 黄酮类特征性 假阳性 反应 黄酮醇、二氢黄酮醇 红~紫红 鉴别反应 （花色素） （最常用） 查耳酮、橙酮、 （-） 儿茶素类、异黄酮 （-） 四氢硼钠 二氢黄酮、二氢黄酮醇 红~紫红 二氢黄酮类特有 还原反应 其它黄酮类 （-） 钠汞齐反应