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实验七聚合酶链式反应PCR技术;实验七 聚合酶链式反应（PCR）技术 ;1. 实验目的
2. 实验原理
3. 实验仪器、材料与试剂
4. 实验步骤
5. 实验结果与讨论
;实验目的;实验原理;PCR：变性－退火－延伸;PCR;;
反应分为三步：
1.变性：在高温条件下，DNA双链解离形成单链DNA；
2.退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链；
3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应。
以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达到~106~7个拷贝。 ;PCR技术的参数主要有7个：
聚合酶、引物、dNTPs、反应buffer、二价离子、模板、一价离子。 ;实验仪器、材料与试剂;（二）材料
模板DNA ;（三）试剂
1. 10x PCR buffer
2. dNTPs 2.5mM
3. Taq 酶 5u/μl
4. 引物1和2( 2μmol/L) (T3,T7)
5. 模板;实验步骤;2. 按下述循环程序进行扩增
94℃ 5分钟，1个循环；
94℃ 30秒，52℃ 30秒，72℃ 30秒，30个循环；
72℃ 延伸10 分钟。
4℃保温。 ;3. 扩增结束后取50μl扩增产物，利用琼脂糖电泳检测DNA扩增情况,并切胶用于回收. ;实验结果与讨论; 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 M;第19页/共21页;PCR引物设计;感谢您的欣赏
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