DNA的粗提取与鉴定课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

DNA的粗提取与鉴定 问题探讨 DNA存在于细胞内部，如果要在体外对DNA进行操作，第一步应该怎么做？将DNA提取出来，并进行鉴定　　　如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢? 04一、实验原理 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精DNA能溶于物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液在一定温度下（沸水浴），DNA被二苯胺试剂染成蓝色初步分离DNA和蛋白质溶解DNA鉴定DNA00.14NaCI浓度（mol/L）DNA溶解度 04DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。（注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。）1.选材：2.试剂：①研磨液 ②体积分数为95%的酒精③2mol/L 的NaCl溶液④二苯胺试剂⑤蒸馏水——含有NaCl、EDTA、 SDS、Tris和HCl——析出DNA——溶解DNA——鉴定DNA，要现配现用二、材料用具研磨液、二苯胺的配制方法 课本P117洗涤剂SDS:使蛋白质变性与DNA分离;EDTA:是一种DNA酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA;Tris:提供缓冲体系，DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。拓展了解 1.取材、研磨2.过滤或离心取上清液3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定三、方法步骤 1.取材、研磨 称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨①研磨的目的？ 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中②研磨时间不宜太长？ 防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量③有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶？ 研磨效果好（有利于充分研磨）④研磨不宜太用力。 三、方法步骤 2.过滤或离心取上清液 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。 也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有核蛋白、多糖等杂质②低温放置几分钟的作用？ 可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； 抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出； 低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。三、方法步骤 3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分； 或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。①搅拌时应轻缓、并沿一个方向？ 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子②酒精预冷的作用？ 同“低温放置的作用”三、方法步骤 4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定 取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。实验组对照组水浴加热*溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关。三、方法步骤 DNA粗提取与鉴定操作提示①获取材料时，选取DNA含量多的，不同实验材料提取DNA的方法可能稍有不同。②粗提取DNA时，用玻璃棒搅拌含有悬浮物的溶液时，不要直插烧杯底部，搅拌要轻缓、并沿一个方向，以便获得较完整的DNA分子。③二苯胺试剂现配现用，否则会影响鉴定结果。④查阅资料了解实验室提取纯度高的DNA的方法。 应用探究1.下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是( )A. DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂B. 预冷的乙醇溶液可用来粗提取DNAC. 用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热D. 鉴定DNA时，应将丝状物直接加入到二苯胺试剂中进行沸水浴D 应用探究2.如图为“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关操作。(1)图中实验材料A可以是_________________________等，研磨前加入的B应该是_________________。(2)通过上述所示步骤得到滤液C后，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取________，向其中加入等体积、预冷的酒精溶液，析出的白色丝状物为______________。洋葱（花菜、香蕉、猪肝）配置好的研磨液上清液粗提取的DNA 应用探究G1B液中