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酪蛋白制备及 Barford 测定
（一）酪蛋白制备
1、将 15 ml 牛奶加热到 40°C ；在搅拌下慢慢加入预热到40°C、pH4.6 的醋酸缓冲液 15 ml；用精密
pH 试纸调至 pH4.7。
2、冷却至室温，3500 rpm 离心 10min，弃上清，得酪蛋白粗品。
3、沉淀中加入去离子水 10 ml，搅拌均匀，3500 rpm 离心 10min，弃上清。
4、重复上述步骤三。
5、沉淀中加入 5 ml 98% 乙醇，搅拌均匀，3500 rpm 离心 10min，弃上清，加入无水乙醇洗涤一次，
作用时间不少于 5 min。
6、沉淀摊在表面皿上蒸干，得酪蛋白纯品。
7、分析天平称重，计算含量和得率。
（二）Barford 法测定蛋白质含量
一、标准曲线的制备
取 100μL BSA 标准溶液（5mg/ml）加入去离子水2.4ml 稀释至终浓度为 0.2mg/ml
将 6 支 10ml 试管编号，依次加入以下试剂，每加一种都要混合均匀 （平行三组）。
1 2 3 4 5 6
稀释 BSA 溶液（0.2 mg/ml ）μL 0 100 200 300 400 500
去离子水 μL 500 400 300 200 100 0
1X 考马斯亮蓝 G250 mL 5 5 5 5 5 5
显色反应 室温放置 5 min
需要可见光薄层 测定 A595nm
二、未知蛋白样品中蛋白质含量测定
1、取未知蛋白溶液 500μL，加入1X 考马斯亮蓝 G250 5 ml ，室温放置5 min ，测定A595nm （需做三
个平行试管）。
2、根据待测样品的OD 值，利用标准曲线计算蛋白含量，进而计算出未知蛋白的浓度。
网络工程师持证人
本人已从事浙江省工程咨询5年，对浙江省内工程信息非常熟悉，可获取新建工程相关联系人、设计院、业主等关键信息。另外从事楼宇自控专业已10年，考取了一建二建等资格证书，有关考试方面的问题（考试心得、方法、学习资料等）都欢饮来咨询交流。
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